开口箭提取物细胞毒活性研究

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1、开口箭提取物细胞毒活性研究【摘要】目的通过体外细胞培养技术，探讨开口箭提取物的细胞毒活性，为进行深层次研究提供依据。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法。结果开口箭甲醇提取物、总皂苷、30%总皂苷和70%总皂苷对HL-60和Caski细胞的抑制作用显著，与阴性对照相比（P<0.05）,对HL-60细胞的抑制率达到60.12%，72.25%，89.09%，95.17%，其IC50为65.57，45.07，35.40，22.89μg/ml。对Caski细胞的抑制率达到63.94%，71.48%，62.4

2、9%，73.43%，其IC50为108.42，84.53，41.02，47.19μg/ml。结论开口箭提取物对HL-60和Caski细胞具有明显的抑制作用。【关键词】开口箭；皂苷；MTT法；细胞毒活性　　　Abstract：ObjectiveToobservethecytotoxicitiesoftheextractsofTupistrachinensisBak.ethodsonHL-60andCaskitumorcells.ResultsTheinhibitioneffectoftheextractsof

3、TupistrachinensisBak.,totalsaponins,30%totalsaponinsand70%totalsaponinsonHL-60andCaskicellsinent,paredodelgroup(P<0.05).ThEirinhibitionratiosonHL-60tumorcellsl.TheirinhibitionratiosonCaskicellsl.ConclusionTheextractsofTupistrachinensisBak.havesignifican

4、tcytotoxicityonHL-60andCaskitumorcells.　　Keyethod；Cytotoxicity　　开口箭（TupistrachinensisBak.）系百合科Liliaceae铃兰族开口箭属植物，为著名的传统中药，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛等症，民间用于治疗咽喉炎、扁桃体炎等。现证明开口箭具有祛痰、抗炎、抑菌及醒酒作用［1，2］。　　本实验室通过实验证实湖北省产开口箭含有甾体皂苷和甾体皂苷元,且含量较高［3］。皂苷具有增强免疫功能、抗辐射、抑制肿瘤生长、抗炎、降血糖等广泛

5、的生物学活性,近年越来越受人们的普遍关注。有研究证实开口箭同属植物皂苷成分有细胞毒活性［4，5］。本文旨在通过体外抗肿瘤实验,观察开口箭提取物对HL-60和Caski细胞的细胞毒活性,现报告如下。　　1材料　　1.1细胞株人急性淋巴细胞性白血病细胞（HL-60）、人宫颈鳞状上皮癌细胞(Caski)均由三峡大学免疫教研室提供。　　1.2药品与仪器RPMI-1640为美国GIBCO公司产品；新生小牛血清为杭州四季青生物材料有限公司产品；HEPES为美国Sigma公司产品，胰蛋白酶为美国GIBCO公司产品；四氮唑

6、蓝(MTT)为美国AMRESCO公司产品；丝裂霉素(MMC，浙江海正药液股份有限公司，批号：051211)；酶联免疫检测仪(GENIOSTECAN)；CO2培养箱（日本三洋公司）；LD4-2A离心机(北京医用离心机厂)；96孔板(美国Cornning公司)。　　开口箭根茎于2002-07采自湖北省神农架林区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为TupistrachinensisBak.，标本存放于湖北省天然产物研究与利用重点实验室（编号：TC200207SNJ）。　　1.3药物制备开口箭根茎粉碎后

7、，用甲醇回流提取3次，合并3次提取液，浓缩后经石油醚脱脂用水饱和的正丁醇萃取，旋转蒸发回收正丁醇，浓缩液抽干后即得到开口箭总皂苷，配成水液，过大孔树脂柱，水洗，30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇梯度洗脱，得开口箭四部分皂苷。　　分别取开口箭甲醇提取物、开口箭总皂苷、30%开口箭皂苷、70%开口箭皂苷4个样品，用含10%灭活的新生小牛血清RPMI-1640培养液将其配制成所需浓度，依次为62.5,125,250,500,1000,2000μg/ml。丝裂霉素(MMC)用含10%灭活的新生小牛血清RPMI-16

8、40培养液将其配置为250μg/ml。所有受试样品均用0.22μm微孔滤膜过滤除菌。　　2方法　　2.1细胞培养HL-60和Caski细胞用RPMI-1640培养液（另加10mmol/LHEPES,2.0mg/mlNaHCO3，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素和10%新生小牛血清），于CO2孵箱中37℃，5%CO2饱和湿度下培养。贴壁细胞用含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化传代。　　2.2M