开口箭提取物体外抗肿瘤实验探究

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1、开口箭提取物体外抗肿瘤实验探究李青邹坤汪❷植摘要目的：探讨开口箭提取物体外抗肿瘤作用。方法：采用四甲基偶氮瞠盐(MTF)比色法。结果：开口箭提取物、总皂昔、30%乙醇洗脱部分和70%乙醇洗脱部分对人宫颈癌Hela细胞和人鼻咽癌CNE一1细胞的抑制作用明显，与阴性对照组比差异有显著性(P〈0.05,P〈0.01),对Hela细胞的IC50分别为114.99ug/ml.72.25ug/ml.39.40ug/ml和45.82ug/ml,对CNE-1细胞的IC50分别为106.82ug/ml.89.75ug/ml、60.72Ug/ml和64.45ug/m

2、l。结论：开口箭提取物体外有抗肿瘤作用。关键词开口箭皂昔MTT法抗肿瘤开口箭(TupistrachinensisBak.)为百合科(Liliaceae)铃兰族开口箭属植物，为著名的传统中药，具有清热解毒、益气活血、散瘀止痛等多种功效，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛等症，民间用于治疗咽喉炎、扁桃体炎等。现证明开口箭具有祛痰、抗炎、抑菌及醒酒作用。本实验室通过实验证实湖北省产开口箭含有辎体皂昔和笛体皂昔元，且含量较高。皂昔具有增强免疫功能、抗辐射、抑制肿瘤生长、抗炎、降血糖等广泛的生物学活性，近年越来越受人们的普遍关注。有研究证实开口箭同属植物皂昔

3、成分有细胞毒活性。本文旨在通过体外抗肿瘤实验，观察开口箭提取物对Hela和CNE-1细胞的增殖抑制作用，现将结果报告如下。1实验材料1.1细胞株人宫颈癌细胞(Hela)和鼻咽癌细胞(CNE-1)均由三峡大学医学院免疫教研室提供。1.2药品与仪器RPMI-1640为美国GIBCO公司产品；新生小牛血清为杭州四季青生物材料有限公司产品;HEPES为美国Sigma公司产品；胰蛋白酶为美国G1BC0公司产品；四氮呢蓝(MTT)为美国AMRESCO公司产品；丝裂霉素(MMC)为浙江海正药业股份有限公司产品；酶联免疫检测仪(GENIOSTECAN)；C02培

4、养箱(日本三洋公司)；LIM-2A离心机(北京医用离心机厂)；96孔板(美国Coming公司)。开口箭根茎于2002年7月采自湖北省神农架林区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为TupistrachinensisBak.,标本存放于湖北省天然产物研究与利用重点实验室(编号：TC200207SNJ)o1.3药物制备开口箭根茎粉碎后，用甲醇回流提取3次，合并3次提取液，浓缩后经石油瞇脱脂用水饱和的正丁醇萃取，旋转蒸发回收正丁醇，浓缩液抽干后即得到开口箭总皂昔，配成水液，过大孔树脂柱，水洗，30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇梯度洗脱，得开口

5、箭四部分皂昔。分别取开口箭甲醇提取物、总皂昔、30%乙醇洗脱部分、70%乙醇洗脱部分4个样品，用含10%灭活的新生小牛血清RP-MI-1640培养液将其配制成所需浓度,依次为62.5、125、250、500、1000、2000ug/ml„丝裂霉素（MMC）用含10%灭活的新生小牛血清RPMI-1640培养液将其配置为250ug/mlo所有受试样品均用0.22um微孔滤膜过滤除菌。2实验方法1.1细胞培养Hela和CNE-1细胞用RP-MI-1640培养液（另加10mMHEPES、2.0mg/mlNaHC03.100U/ml青霉素、100ug/ml

6、链霉素和10%新生小牛血清），于C02孵箱中37°C.5%C02饱和湿度下培养。细胞用含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化传代。1.2MTY比色法MTT比色法按Mosmann氏法略加改进。将处于对数生长期的细胞制成单个细胞悬液，调整细胞浓度为0.8X105个/ml,接种于96孔培养板，每孔接种180U1,转板6h后加20卩1受试药，另设阴性对照组（不加药）、空白调零组（只有培养基）和阳性对照组（MMC组），每组均设6个复孔，培养48h后加MTT（5mg/ml）15ul,继续培养4h后,弃去上清液,加DMSOlOOul,用全自动酶联免疫检测

7、仪于492nm波长处测定吸光度（OD）值，求出IC50o抑制率（%）=[1-（实验组0D均值-空白组0D均值）/（对照组0D均值-空白组0D均值）]X100%。1.3统计学处理实验数据以x±s表示，数据分析采用SPSS11.5统计软件进行。用Origin软件，通过半对数抑合直线求IC50值。3实验结果2.1开口箭总提取物和总皂昔对Hela细胞的影响。可知开口箭总提取物和总皂昔对Hela细胞的抑制作用显著，与阴性对照组相比有显著性差异（P〈0.05或P<0.01）,且呈良好的量效关系，随着药物浓度的增加，抑制效果越明显。1.2开口箭30%乙醇洗脱部

8、分和开口箭70%乙醇洗脱部分对Hela细胞的影响。由表2可知开口箭30%乙醇洗脱部分和70%乙醇洗脱部分对Hela细胞的抑制作用显著，与