红毛毡提取物体外抗肿瘤的实验研究

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1、红毛毡提取物体外抗肿瘤的实验研究【摘要】目的：探讨红毛毡提取物的体外抗癌作用。方法：用MTT法检测红毛毡提取物对13种肿瘤细胞株体外生长的抑制作用。结果：红毛毡提取物对所试肿瘤细胞株的体外生长均具有较强的抑制作用，其中对急性T细胞白血病细胞Jurkat、人肾癌细胞OSRC2、人慢性髓质白血病细胞K562、人肺癌细胞A549和人乳腺导管癌细胞MDAMB435s的作用强，半数抑制浓度(IC50)分别为9.25±3.68、10.75±2.40、10.90±3.74、11.21±3.07和12.66±1.19μg·ml-1，

2、其次是对人食管癌细胞Eca109、人胰腺癌细胞PANC1、人黑色素瘤细胞A375、人肝癌细胞QGY7703和人胃癌细胞SGC7901，半数抑制浓度(IC50)分别为14.36±2.26、15.36±6.73、15.48±1.98、17.21±10.32和19.01±5.95μg·ml-1。结论：红毛毡提取物具有广谱抗肿瘤作用。【关键词】红毛毡提取物;MTT;广谱;IC50红毛毡(Ardisia7mamillata),又名佛光江、老虎舌、红毛走马胎、红地毡、虎舌红，属紫金牛科植物,是一种广泛分布于中国南方地区的草本植物

3、，具有清热利湿，活血和瘀的功效,常用于治疗痢疾，肝炎，胆囊炎，风湿，跌打劳伤，咳血，吐血，妇女痛经，血崩，小儿疳积，疮疖痈肿疼痛[1]。其叶和茎的皮层和髓部有分泌组织，内含红棕色树脂类物质、岩白菜内酯、挥发油、黄酮类、甙类、鞣质和苯醌等[2],使其具有广泛的生物学活性,为考察红毛毡提取物的体外抗肿瘤作用，我们采用MTT法检测红毛毡提取物对13种肿瘤细胞株体外生长的抑制作用，以筛选出敏感肿瘤类型，了解其作用强度，为体内试验提供参考。　　1材料和方法　　1.1试剂及设备　　红毛毡提取物由本公司工艺室提供，顺铂注射液购自由云南个旧

4、生物药业有限公司，PMI1640、DMEM、L15、胰蛋白酶均为Gibco产品，MTT、台盼蓝为Sigma产品，DMSO为成都科龙化工试剂厂产品，小牛血清购自成都哈里生物工程有限公司，胎牛血清购自Hyclone公司，酶联检测仪，BIORAD550型，BIORAD公司产品，CO2培养箱，Thermo371型，美国热电公司产品，倒置显微镜，CK40F200型，日本OLMPUS产品。　　1.2细胞培养　　SGC7901，人胃癌细胞;QGY7703，人肝癌细胞;A549，人肺癌细胞;K562，人慢性髓质白血病细胞;PC3

5、，人前列腺癌细胞;HT29，人结肠癌细胞;OSRC2，人肾癌细胞;MDAMB7435s，人乳腺导管癌细胞;HO8910，人卵巢癌细胞;A375，人黑色素瘤细胞;PANC1，人胰腺癌细胞;Jurkat，急性T细胞白血病细胞;Eca109，人食管癌细胞;购于中科院上海生命科学研究院细胞库。分别培养于RPMI1640+10%小牛血清，RPMI1640+10%胎牛血清，DMEM+10%胎牛血清，L15+10%胎牛血清，1%Lglutamine，1×105U·L-1青霉素和100mg·L-1链霉素的各培养液中,

6、在37℃，5%CO2培养箱培养。　　1.3体外抗癌试验　　1.3.1贴壁细胞　　贴壁细胞经常规传代培养至对数生长期，弃旧培养液，加入0.25%胰酶+0.02%EDTA消化，待细胞变圆成单个时，加入完全培养液，轻轻吹打，使其形成单细胞悬液。收集细胞至离心管中。1000rpm·min-1离心5min。弃去上清，沉淀加入培养基悬浮混匀。台盼蓝排斥法进行细胞计数，调整细胞浓度至1×105细胞·ml-1的细胞悬液。取96孔板，每孔用移液器加入细胞悬液200μl，使每孔细胞数为2.0×104个。置37℃、5%CO2培养箱中培养24h后取

7、出96孔板，移液器小心吸去上清液，每孔分别加入用完全培养液配制的药物溶液200μl，每个浓度设三个复孔。细胞对照组加200μl的完全培养液，阳性对照加入顺铂药液200μl，每个浓度三个复孔。置37℃、5%CO2培养箱中培养48h后取96孔板，直接加20μlMTT溶液，37℃7、5%CO2培养箱继续培养4h，吸去上清液，每孔加入二甲亚砜150μl，充分振荡5min溶解，酶标仪490nm处测定去空白OD值，参比波长655nm。　　1.3.2悬浮细胞　　悬浮细胞经常规传代培养至对数生长期，直接用吸管轻轻吹打，使其形成单细胞悬液。收

8、集细胞至离心管中，1000rpm·min-1离心5min。台盼蓝排斥法进行细胞计数，调整细胞浓度至2×105细胞·ml-1的细胞悬液。取96孔板，每孔用移液器加入细胞悬液100μl，每孔细胞数为2.0×104，每孔分别加入用完全培养液配制的药液100μl，每个浓度设三个复孔。细胞对照加10