拉米夫定联合α干扰素序贯处理增强干扰素诱导跨膜蛋白表达的研究-论文.pdf

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1、·1568·中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2013Nov；29(11)：1568～72网络出版时间：2013—10—2615：29网络出版地址：http：／／wWW．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20131026．1529．022．html拉米夫定联合干扰素序贯处理增强干扰素诱导跨膜蛋白表达的研究杨凯，管世鹤，王爱华，潘颖，吴园园，孙蓓蓓(安徽医科大学第二附属医院检验科，安徽舍肥230601)doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2013．11．022乙型肝炎是危害人

2、类健康的重要疾病之一，且文献标志码：A文章编号：1001—1978(2013)11—1568—05随着时问进程可能会发展为慢性乙肝、肝纤维化、肝中国图书分类号：R329．25；R341；R373．21；R512．62；硬化甚至肝细胞癌¨。IFN—Ot和拉米夫定是临床上R977．6；R978．7两种重要的抗HBV药物。其中，IFN一仅是一种细胞摘要：目的了解0【干扰素(IFN—Or_)单独处理和拉米夫定联因子，能够通过诱导宿主细胞表达抗病毒蛋白：如双合IFN一序贯处理对人肝胚瘤细胞株HepG2．2．15表达干链RNA激活的蛋白激酶(PKR)、2，5一寡腺苷酸合扰素

3、诱导跨膜蛋白(IFITM1、IFITM2、IFITM3)的影响，探讨成酶(2，5一OAS)、抗粘液病毒A蛋白(MxA)、抗粘拉米夫定与IFN一旺序贯处理抗病毒机制。方法以0～1000kU·LIFN一0【连续处理的HepG2．2．15细胞为d干液病毒B蛋白(MxB)，进而发挥抗HBV活性；抗病扰素单独处理组，以20pumol·L拉米夫定联合0～1000毒核苷类似物拉米夫定主要抑制HBV多聚酶的逆kU-I-．—IFN—处理的HepG2．2．15细胞为序贯处理组；分转录酶活性，从而有效阻止病毒核酸的复制合别用免疫印迹法和Southernblot法检测不同组别细胞内干成

4、J。有学者研究报道显示，拉米夫定联合IFN一扰素诱导跨膜蛋白1FITM1、IFITM2、IFITM3的表达和细胞内序贯治疗慢性乙型肝炎疗效明显优越于IFN—Ot单HBV复制水平，再将表达抗病毒蛋白IFITM1的真核表达质独治疗j。此外，本课题组前期研究也发现，在体粒pEGFP—IFITM1转染人HepG2．2．15细胞，以ELISA和荧外实验中拉米夫定联合IFN一仪序贯处理光定量PCR法分别分析细胞外HBV抗原分泌和HBV—DNAHepG2．2．15细胞后，细胞内的HBV复制明显减少，水平。结果免疫印迹分析提示IFN—单独处理和拉米夫而1FN一单独处理对HepG

5、2．2．15细胞内HBV复定联合IFN—序贯处理均能诱导HepG2．2．15细胞表达干扰制没有明显影响，但相关的分子生物学机制尚未阐素诱导跨膜蛋白1FITM1、IFITM2、IFITM3，并且拉米夫定联明。为此，本实验通过分析比较IFN一仅单独处理合IFN一序贯处理能够明显增强干扰素诱导跨膜蛋白IF—IFM1的表达；Southernblot法分析表明IFN—Ot单独处理和拉米夫定联合IFN—Ot序贯处理对人肝胚瘤细胞株HepG2．2．15细胞不能有效抑制细胞内HBV复制，而拉米夫HepG2．2．15表达干扰素诱导跨膜蛋白(IFITM1、IF—定联合IFN一仪序贯

6、处理能够完全抑制细胞内HBV复制。进ITM2、IFITM3)的影响，研究拉米夫定与IFN—OL序贯·步研究发现，拉米夫定联合IFN—OL序贯处理诱导的干扰素处理的抗HBV机制。诱导跨膜蛋白IFITM1具有一定抗HBV活性。结论在体1材料与方法外细胞模型中，IFN—Ot能够诱导HepG2．2．15细胞表达干扰1．1试剂转染试剂盒脂质体Lipofectamine⋯2000素诱导跨膜蛋白IFITM1、IFITM2、IFITM3；拉米夫定联合购自Invitrogen公司。IFN．dlb购自深圳科兴生物IFN—Ot序贯处理能够增强HepG2．2．15细胞表达干扰素诱导工程

7、有限公司。抗IFITMI、IFITM2、IFITM3购自跨膜蛋白1FITM1，这可能是拉米夫定联合IFN—Ot序贯治疗SantaCruz公司。二抗购自中杉金桥公司。质粒慢性乙型肝炎重要机制之一。pEGFP．N1购自Invitrogen公司。质粒pEGFP—IF—关键词：肝炎病毒，乙型；拉米夫定；干扰素；序贯治疗；干扰ITM1和HepG2．2．15细胞由本实验室保存。素诱导跨膜蛋白1．2质粒的提取及酶切鉴定分别摇含有质粒收稿日期：2013—06—25，修回日期：2013—07一l7pEGFP—N1、pEGFPIFITM1菌液各300ml，采用Pure基金项日：围家

8、自然科学基金资助项目(N