广西巴马小型猪ApoE基因外显子2片段的多态性分析-论文.pdf

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1、第31卷第3期实验动物科学Vol_31NO．32014年6月LAB0RATORYANIMALSCIENCEJune2014驴痧移驴研究报告驴、：2、护广西巴马小型猪DE基因外显子2片段的多态性分析黄碉萌韦玲静蒋钦杨兰干球郭亚芬(广西大学动物科学技术学院，南宁530004)摘要：目的克隆广西巴马小型猪载脂蛋白E(ApoE)基因外显子2片段并分析该片段的多态性，为建立广西巴马小型猪动脉粥样硬化模型奠定基础。方法以广西巴马小型猪基因组DNA为模板，PCR扩增ApoE基因片段，应用PCR—SSCP方法分析其多态

2、性。结果克隆获得长237bp的却oE基因外显子2片段，测序结果比对参考序列同源性为100％。PCR—SSCP分析发现在该片段的229位点存在多态性，表现为AA型、AT型和TT型3种基因型。结论成功克隆广西巴马小型猪oE基因外显子2片段，该片段存在多态性，有AA、AT和TT3种基因型，基因型频率分别为0．302、0．489和0．209。关键词：广西巴马小型猪；载脂蛋白E；PCR-SSCP中图分类号：Q38文献标识码：A文章编号：1006—6179(2014)03O42—04载脂蛋白E(ApoE)是由多种脂

3、蛋白构成的一测到人ApDE基因的第二、第三外显子及两侧的部种多功能分子，是血浆脂蛋白的重要组成成分。分内含子没有多态性。一直以来，对载脂蛋白E基ApoE通过低密度脂蛋白胆固醇(LDL)受体途径摄因的研究对象主要集中在人和小鼠，载脂蛋白E基取脂蛋白残粒，在体内脂蛋白代谢过程中有重要生因敲除小鼠被广泛用作该基因作用机制研究的动物理作用。猪的ApoE基因位于第6号染色体上，全长模型，而对于猪Ap0E基因的研究在国内比较少。4267bp，由4个外显子和3个内含子组成。猪本文对广西巴马小型猪ApoE基因序列进行多

4、态性ApoE基因主要在肝和脑组织中表达，在脾、肺、肾、分析，为筛选进而建立广西巴马小型猪动脉粥样硬大肠和小肠也有不同程度的表达，而在心、胃、背肌化模型奠定基础。和淋巴中几乎不表达。却oE基因多态性对血脂水平有重要影响，进而关联到冠心病及动脉粥样硬1材料和方法化病理的发生和发展。却oE基因的缺失能促进动脉粥样硬化的发生。由于却oE在胆固醇和其他1．1材料脂质的代谢中所起的关键作用，研究ApoE基因对1．1．1实验动物：广西巴马小型猪137头，从前腔猪的重要经济性状如肉质性状、繁殖性状等的影响静脉采集3mL

5、血液于肝素钠抗凝管中。显得尤为重要。却oE基因敲除小鼠在注射却oE重1．1．2主要实验试剂：血液／细胞／组织基因组组蛋白或移植带有ApoE基因的骨髓后都能使其动DNA提取试剂盒、DNA胶回收纯化试剂盒购自北京脉粥样硬化症状得到缓解。李仕新等研究猪天根生化科技有限公司；pMD18一T载体、限制性内ApoE外显子4的多态性时发现在外显子4的227切酶购自TaKaRa公司；PCRTaqMix和DNAMarker位点有碱基突变(C／T)，其相应蛋白质序列的氨基I购自江苏康维生物有限公司；30％丙烯酰胺、95％酸

6、发生改变。李光荣等利用直接测序的方法检去离子甲酰胺、四甲基乙二胺(TEMED)、琼脂糖为收稿日期：2014—05—06基金项目：国家自然科学基金项目(No．81360135)；广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻1347003-2)；广西自然科学基金项目(No．2013GXNSFAAO19187)作者简介：黄弱萌(1991一)，女，硕士研究生。研究方向：动物遗传育种。E—mail：441302699@qq．eom通信作者：蒋钦杨(1981一)，男。博士，副教授，主要从事动物遗传育种研究工作。E-mai

7、l：18876010@qq．eom第3期黄弱萌等：广西巴马小型猪却oE基因外显子2片段的多态性分析·45·[2]李仕新，高萍，陈赞谋，等．猪APOE基因外显子4的多态性[7]何江，周常文，徐江涛，等．载脂蛋白E基因PCR-RFLP分分析[J]．江西农业大学学报，2010，32(4)：647-650．析方法的建立[J]．中国优生与遗传杂志，2004，12(6)：[3]杨秀丽，张文高，郑广娟．幼龄APOE基因敲除小鼠认知功能39—40．障碍的跳台实验[J]．中国行为医学科学，2007，16[8]陆元善．载脂

8、蛋白E多态性分析方法的研究进展[J]．中国动(12)：1077．脉硬化杂志，1997，5(1)：35O一352．[4]JawienJ．NastalekP．KorbutR．Mousemodelsofexperimental[9]李会成，李玉新．载脂蛋白E研究进展[J]．生物工程进展，atherosclerosis[J]．JPhysiolPhannacol，2004，55(3)：17—5O．2002，22(2)：74—79．[5]李仕新，高萍，