HDGF基因在肝癌和癌旁组织中表达情况的检测-论文.pdf

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1、第32卷第1期广西师范大学学报：自然科学版Vo1．32NO．12014年3月JournalofGuangxiNormalUniversity：NaturalScienceEditionMar．2014HDGF基因在肝癌和癌旁组织中表达情况的检测林万华。。，赵林。，刘晓灿，谭涛，杨栋林，周祖平(1．广西师范大学生命科学学院，广西桂林54l004；2．广西师范大学干细胞与医药生物技术实验室，广西桂林541004；3．广西师范大学校医院，广西桂林541004)摘要：本文采用半定量RT—PCR法分析4O对肝癌癌组织及其旁组织

2、中HDGF基因的表达情况，结果表明：9O(36例／40例)患者肝癌组织内HDGF的表达明显高于其癌旁组织。HDGF表达上调可能与癌症的发生发展密切相关，提示检测HDGF的表达有望成为肝癌临床诊疗指标之一。关键词：肝癌组织；肝癌旁组织；HDGF；半定量RT—PCR中图分类号：R735．7文献标识码：A文章编号：l()(]】6600(20l4)0l0118一O5肝癌衍生生长因子(HDGF—Hepatoma—derivedgrowthfactor)是一种最先从培养的人类肝癌细胞株HuH7限制性培养基中分离纯化得到的酸性肝素

3、结合蛋白，是HDGF蛋白家族中最先发现的成员，具有有丝分裂原活性[1。在Swiss3T3细胞中能刺激DNA合成，在肝细胞、肝癌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞、神经细胞中均有表达，在胃癌和肝癌细胞中呈现出过量表达；有关研究显示它与肝及其他组织器官的发育生长和癌症的发生密切相关l3]。本研究以半定量RT—PCR法检测HDGF在肝癌和癌旁组织中的表达情况，拟为其应用奠定一定的基础。l材料与方法1．1材料肝癌与癌旁组织cDNA系复旦大学余龙教授惠赠。原材料经医院医学伦理委员会同意并与患者签署知情同意书后，从上海长

4、江医院、广州中山肿瘤医院收集了40例原发性肝癌患者手术切除后肿瘤组织，将病理组织学证实的癌组织和癌旁组织分开，4O对80块，立即置液氮速冻后，于一80℃保存备用。1．2RNA总提取利用Trizol法(Invitrogen公司)提取RNA，去离子水经DEPC处理且灭菌。所用剪刀、镊子经180℃烘烤4h以热失活RNA酶，研磨组织玻璃匀浆器等器械经DEPC水灭活RNA酶处理，其他Tip头、Eppendorf管(Axygen)等为无RNA酶原装。1．3cDNA第一链的合成每样取2g总RNA，利用Oligo(dT)。引物(Pr

5、omega公司)和逆转录试剂盒SuperScript。IIRT(Invitrogen公司)按说明书方法合成cDNA第一链，稀释40倍后作为半定量PCR的模板。1．4聚合酶链式反应(PCR)扩增1．4．1引物合成与退火温度确定根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)发布的人HDGF基因和人8_微球蛋白(13-microglobulin#MG)基因mRNA的序列，采用Primer3．0软件自行设计。HDGF基因引物序列上游：gagaaggaggcagccaccttg，收稿日期：2O13O8—24基金项目：围家自然科学基金

6、资助项目(31270949)；广西师范大学青年骨干教师科研基金资助项目通信联系人：林万华(1975)，男，江西南康人，广西师范大学教师，博士。E—mail：linwhky@foxmail．com第1期林万华等：HDGF基因在肝癌和癌旁组织中表达情况的检测121嚣O9876543210123456789l0ll12l3l41516171819202122232425262728293031323334353637383940样品图44O对肝癌与癌旁组织中HDGF基因mRNA表达水平的比值Fig．4RatioofHDGF

7、mRNAexpressionlevelsinhepatomatissuesamplesandtheadjacentnontumortissuesamplesof40patients高表达于睾丸和骨骼肌中，其可能的作用包括：①以自分泌或旁分泌方式起作用的分泌型生长因子；②作为一种核因子，调控基因的表达和DNA的合成，像其他生长因子(FGF、PDGF、IGF一1)一样，表现出对多种细胞的促有丝分裂作用_5]。Okuda等[g用稳定转染NIH3T3一HDGF的细胞接种裸鼠，发现NIH3T3一HDGF转染细胞有明显成瘤作用，

8、而HDGF表达越高，则裸鼠生成肿瘤所需的时间越短，而NIH3T3细胞和空载细胞并未生成肿瘤，证实HDGF确有促进肿瘤形成的作用。Kaplan—Meier通过RT—PCR和Western印迹证实了HDGF在肝癌细胞中存在普遍表达，明显高于周围正常肝组织“；有关研究还发现HDGF低表达的患者的预后明显优于高表达的患者，提示HDGF也是肝癌重要的预后