教学讲稿电泳技术课件

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1、电泳技术1电泳：带电粒子在电场中向着与其本身电荷相反的电极移动的过程。2电泳技术优点：快速、准确、重现性好3电泳方法分类按电场分：常压（<500V，适用大分子）、高压（>500V，适用小分子）支持体分：自由电泳、区带电泳仪器装置分：水平式、垂直式、悬架式4电泳条件：水溶液（缓冲液）、支持物（区带电泳）、电场（电泳仪、电泳槽）一电泳的基本原理电泳分离：移动方向：带电性质决定泳动度：带电颗粒在单位电场强度下的移动速度。μ＝v/E=(d/t)/(V/l)=(dl)/Vt影响μ的因素：1颗粒本身：带电、大小、形状2外界因素

2、：电场强度E、pH、离子强度I、电渗、缓冲液粘度及温度等。二电泳的分类分为自由电泳（无支持体）和区带电泳（有支持体）两大类。自由电泳包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。区带电泳包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。三纸电泳以滤纸为支持体的电泳技术操作要点：1选择缓冲液对显色剂和紫外光吸收等观察区带的方法无影响2滤纸的选择与处理层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响电场强度。3点样点圆点（量少）、点

3、条状（一般），点中间（未知样品）、点一边（已知样品）干法、湿法4电泳电桥水平、加盖、电压稳定、注意时间5显色及分析蛋白：溴酚兰、氨黑10B、偶氮胭脂红BAa：茚三酮、靛红核酸：紫外光下观察一般洗脱定量四薄膜电泳支持体：薄膜优点：分辨力较高、简便、快速、区带清晰、易于定量、便于保存广泛应用于蛋白质和同工酶等的分离分析操作1薄膜的处理与放置2点样平衡3电泳：E10~25V/cm，0.5～2h4显色五薄层电泳将支持物与缓冲液调制成适当厚度的薄层进行电泳。常用支持物：淀粉、琼脂、纤维素粉、硅胶等操作：1缓冲液选择离子强度较

4、高的缓冲液2支持物处理精制品3薄层板制作4加样：挖沟、混合样品、填埋5电泳6分析：印染法六凝胶电泳支持物：多孔凝胶聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等具有电泳和分子筛的双重作用，分辨力高最常用聚丙烯酰胺凝胶，原因：机械强度好，透明有弹性，稳定，无吸附作用和电渗作用，可制成不同孔径的凝胶。分类：垂直管型盘状电泳、垂直板型电泳；连续、不连续、梯度、SDS凝胶电泳凝胶电泳的操作要点1凝胶制备2电极缓冲液3样品处理及加样4电泳5染色与固定6脱色7分析烟曲霉菌中抗真菌活性肽类物质的分离与纯化七等电点聚焦电泳电泳系统中加进两性电解质载

5、体，当通已直流电时，两性电解质载体即形成一个由阳极到阴极连续增高的pH梯度。P进入时，不同的P移动到与其等电点相当的pH位置上，从而使不同等电点的P得以分离。优点：分辨率高，区带清晰、窄，加样部位自由，重现性好，可测定P或多肽的等电点。缺点：需无盐溶液，不适用于在等电点不溶解或发生变性的P。1稳定的pH梯度的形成2两性电解质载体要求：由多乙烯多胺与丙烯酸加成制备（有不同pH范围的商品两性电解质载体）3支持pH梯度的介质密度梯度溶液（用于自由电泳）凝胶（如聚丙烯酰胺凝胶）4操作要点pH梯度支持介质的制备聚焦电泳检测两

6、性电解质载体的除去电泳技术思考题1名词解释电泳、电泳分离技术、泳动度、电渗、区带电泳、相对迁移率2影响泳动度的主要因素有哪些？3区带电泳的操作步骤一般有哪些？Bye-Bye