HGF／Met通路对肝癌细胞株MHCC97-H干细胞样表型的影响-论文.pdf

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1、-352·中华消化外科杂志2014年5月第13卷第5期ChinJDigSurg，May2014，Vo1．13，No．5·论著·HGF／Met通路对肝癌细胞株MHCC97一H干细胞样表型的影响阮柏王德盛刘杰李侠张卓超黄启科于泳窦科峰【摘要】目的观察HGF／Met通路对肝癌细胞株MHCC97一H干细胞样表型的影响，探讨其可能的作用机制。方法体外培养肝癌细胞株Huh7和MHCC97一H，采用细胞免疫荧光染色技术筛选高表达Met的肝癌细胞株MHCC97一H，将其分为4组：空白组(不做处理)、HGF刺激组(50LHGF)、抑制组(50

2、g／LHGF+1mol／LHGF抑制剂PHA665752)和表皮生长因子(EGF)／成纤维细胞生长因子(FGF)刺激组(50LHGF+2OLEGF+20LFGF)。Westernblot检测前3组MHCC97一H细胞中Met和磷酸化Met(p-Met)蛋白的表达。培养24h后光镜下观察前3组细胞形态学变化。克隆球形成实验检测4组细胞克隆球形成能力。荧光实时定量PCR检测空白组和HGF刺激组不同时间点(2、4、8、16、24h)MHCC97一H细胞中多能干细胞相关基因表达变化。计量资料采用x±s表示，多组间比较采用单因素方差分

3、析和重复测量的方差分析，两两比较采用LSD—t检验。结果细胞免疫荧光染色检测结果显示：肝癌细胞株MHCC97一H与Huh7细胞比较．前者高表达Met，将其作为后续研究对象。Westernblot检测结果显示：空白组、HGF刺激组和抑制组细胞中Met蛋白的相对表达量分别为0．44±0．04、0．37±0．03和0．41±0．04，3组比较，差异无统计学意义(F=2．31，P>0．05)。而3组细胞中p-Met蛋白的相对表达量分别为0．020±0．010、0．070±0．020和0．010±0．000，3组比较，差异有统计学意义

4、(F：34．11，P<0．05)，其中HGF刺激组p-Met蛋白的表达水平高于空白组和抑制组(t=3．87，5．20，P<0．05)。HGF刺激组MHCC97一H细胞形态呈现长梭状问质样改变，而抑制组和空白组细胞形态相似，呈上皮样。克隆球形成实验结果表明：空白组、HGF刺激组、抑制组和EGF／FGF刺激组克隆球数目分别为0、(35．0±6．3)个、(4．3±1．5)个和(54．3±2．5)个，4组比较，差异有统计学意义(F：511．28，P<0．05)，其中HGF刺激组克隆球数目多于空白组和抑制组(t=9．62，8．21，P

5、<0．05)，而少于EGF／FGF刺激组(t=4．93，P<0．05)。实时定量PCR检测结果显示：空白组和HGF刺激组不同时间点(2、4、8、16、24h)C—mycmRNA相对表达量分别为1．00±0．11、1．68±0．09、1．084-0．24、1．18±0．13、0．78±0．14、1．06±0．04；K1f4mRNA另1为1．00±0．20、1．43±0．16、0．87±0．28、1．19±0．29、2．174-0．43、1．414-0．06；Oct4mRNA分另0为1．004-0．12、0．544-0．12、0

6、．69±0．19、1．08±0．12、1．624-0．30、0．97±0．11，空白组和HGF刺激组不同时间点上述各指标比较，差异均有统计学意义(F=13．64，8．52，13．56，P<0．05)；HGF刺激组2hC—mycmRNA相对表达量达到峰值，与空白组比较，约升高了1．68倍(t：8．29，P<0．05)，HGF刺激组16hKlf4mRNA相对表达量达到峰值，与空白组比较，约升高了2．17倍(t：4．27，P<0．05)，HGF刺激组16hOct4mRNA相对表达量达到峰值，与空白组比较，约升高了1．62倍(t：3

7、．32，P<0．05)。结论HGF／Met通路的活化能够诱导肝癌细胞MHCC97一H的干细胞样表型转化，其可能作用机制是通过增加多能干细胞相关基因的表达而实现的。【关键词】肝肿瘤；肝细胞生长因子；Met；多能干细胞EfectsofHGF／Metsignalingpathwayonstem-likephenotypeofhepat0celIularcarcinomacelllineMHCC97-HRuanBai，WangDesheng，LiuJie，LiXia，ZhangZhuochao，HuangQike，YuYong，Do

8、uKefeng．DepartmentofHepatobiliaryPancreatospleenicSurgery"，XijingHospital，FourthMilitaryMedicalUniversity，Xian710032，ChinaCorrespondingauthor：Dou