乙型肝炎病毒X蛋白对人肝癌细胞hsp90α基因表达调控机制研究-论文.pdf

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1、李卫华，等乙型肝炎病毒x蛋白对人肝癌细胞hsp90~基因表达调控机制研究《实验研究／论著l乙型肝炎病毒X蛋白对人肝癌细胞hsp90c~基因表达调控机制研究李卫华陈广原余湘文石永英彭妙官李慧卫建筠广州医学院第一附属医院感染科，广东广州510102【摘要】目的：探讨乙型肝炎病毒x蛋白(hepatitisBvirusxprotein，HBx)参与人肝癌细胞hsp90~基因表达的调控机制。方法：采用半定量RT—PCR、蛋白质印迹法及荧光素酶活性检测技术，检测不同剂量HBx表达载体转染的HepG2细胞中hsp90a基因mRNA和蛋白表达及启动子活性的变

2、化，并观察转录因子cMyc阻断剂10058一F4对上述效应的影响。采用启动子实验分析c—Myc对hspg0基因启动子的激活作用。RTPCR和蛋白质印迹法检测表达HBx的HepG2细胞中c—MycmRNA和蛋白表达情况；蛋白质印迹法及ELISA分析细胞外信号调节激酶1／2(ERK1／2)和磷酸化ERK1／2(PERK1／2)表达水平及内源性ERK的活性。结果：HBx基因转染HepG2细胞中hspg0基因的tuRNA和蛋白表达水平以及启动子活性呈剂量一依赖性增强，P一0．0061；c—Myc阻断剂抑制了HBx对hsp90a基因表达的上调效应。c—

3、Myc通过与c—Myc位点(一1094／一1088)结合转录激活hsp90a基因启动子活性。HBx使HepG2细胞中c—MycmRNA和蛋白表达增强，并伴有ERK1／2蛋白磷酸化水平增加，ERK活性明显提高，P一0．032。结论：HBx通过ERK信号通路反式激活肝癌细胞c—Myc介导的hspg0d基因启动子活性，从而上调hsp90a基因表达。【关键词】人肝癌细胞株；乙型肝炎病毒X蛋白；hsp90a基因；转录因子c—Myc；表达调控中华肿瘤防治杂志，2013，2o(20)：1574—1579Regulationmechanismexplorat

4、ionofhsp90~expressionbyhepatitisBvirusXproteininhumanhepatocarcinomacellsLIWeihua，CHENGuang—yuan，yUXiang—zuen，SHIYong—ying，PENGMiao—guan，LIHui，WEjJianjunDepartmentofInfectiousDisease，FirstAffiliatedHospitalofOuangzhouMedicalCollege，Guangzhou510102，P．R．China[ABSTRACT]OBJECTI

5、VE：ToexploreHepatitisBvirusXprotein(HBx)inparticipantingtheregulatorymechanismofheatshockprotein90alpha(hsp90a)geneexpressioninhumanhepatomacells．METHODS：Theexpressionofhspg0dmRNAandproteinwereanalyzedbysemiquantitativeRTPCRandWesternblot，andthetranscriptionalactivityofhsp9

6、0apromoterwasdetectedby1uciferaseassayindifferentdosesofHBx-expressingvectortransfectedHepG2．Theim—pactoftranscriptionfactorcMycspecificblocker，10058一F4ontheeffectwasevaluatedTheroleofc—Mycinhsp90apro—．moteractivationwasanalyzedbypromoterassayinHepG2cells．Theexpressionofc—M

7、ycmRNAandproteinweretestedbyRT—PCRandWesternblot，andtheexpressionofextracellularsignal—regulatedkinase1／2(ERK1／2)andphosphoryla—tedERK1／2(p-ERK1／2)wereanalyzedbyWesternblot，theendogenousERKsactivitywasdeterminedbyEIISAassayinHepG2expressingHBx．RESULTS：Theexpressionofhsp90um

8、RNAandproteinandthehsp90promoteractivityweresignificandyincreasedinadosedependentm