欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:15124579
大小:43.00 KB
页数:14页
时间:2018-08-01
《乙型肝炎病毒x基因对肝癌细胞bel7404细胞周期的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、乙型肝炎病毒X基因对肝癌细胞Bel7404细胞周期的影响作者:林松挺1,陈正义,陈莹晖,程斌【摘要】目的:构建转基因细胞株Bel7404/HBx,研究HBx对肝癌细胞周期及凋亡的影响,为探索HBx与原发性肝细胞癌(HCC)之间的关系提供更为完善的理论依据。方法:运用脂质体转染及G418筛选获取Bel7404/HBx阳性克隆,并分别用聚合酶链反应(RTPCR)和Westernblot鉴定HBxmRNA与蛋白的表达,进一步用四唑兰比色实验(MTT)检测Bel7404/HBx的增殖,流式细胞仪(FCM)检测Bel7404/HBx的细胞周期及凋亡。结果:成功构
2、建Bel7404/HBx,MTT检测结果表明Bel7404/HBx生长速度加快,流式细胞仪检测结果显示,与对照组细胞相比,Bel7404/HBx凋亡率明显降低(P<0.05),G1期细胞比例降低(P<0.05),S期及G2期细胞所占比例增高(P<0.05)。结论:HBx能加速细胞周期进程,从而促进肝癌细胞的生长并抑制细胞凋亡,可能对肝癌细胞恶性程度具有重要的影响。【关键词】HBx;原发性肝细胞癌;聚合酶链反应;免疫印迹;四唑兰比色实验;流式细胞术[ABSTRACT]Objective:Toestablishtransgeniccellline
3、s14Bel7404/HBx,studytheinfluenceofHBxoncellcyclesandapoptosis,andprovidemoreextensivetheoriesforexploringtherelationshipbetweenHBxandhepatocellularcarcinoma(HCC).Methods:TheBel7404/HBxpositivecloneswereobtainedbyLipofectaminetranfectionandG418selection,thenHBxmRNAandproteinweredetect
4、edbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)andWesternblot,respectively.Thetetrazoliumbluecolorimetrictest(MTT)andflowcytometer(FCM)wereusedtomeasureproliferation,cellcyclesandapoptosisofBel7404/HBx.Results:Bel7404/HBxwassuccessfullyestablished.MTTshowedthattheBel7404/HBx
5、grewfasterthanthecontrolgroup(P<0.05),andFCMshowedthatcomparedwithcellsincontrolgroup,theapotosisratesofBel7404/HBxwereatalowlevel,cellsinG1phasedecreasedbutincreasedinSandG2phaseinproportion(P<0.05).Conclusions:HBxcanacceleratecellcycleprogressiontopromotethegrowthofhepatomacel
6、lsbutinhibitapoptosis,whichindicatesthatitmayhavegreatinfluenceonthemalignantdegreeofhepatocellularcarcinoma.14[KEYWORDS]HBx;Hepatocellularcarcinoma;RTPCR;Westernblot;MTT;FCM原发性肝细胞癌(HCC)一直以来是危害人民身心健康的一大疾病,其发病机理多种多样,其中HBV在其发病中一直占据重要的地位。目前研究证实,HBV中最小的阅读框X基因在HCC发生中所起的作用至关重要,但各家研究结论不太一致,有
7、的结论甚至互为矛盾,这也使得HBx致癌机理尚未研究清楚。因而,HBx致HCC机理仍然是目前研究的热点,为此,我们以重组质粒pcDNA3.1(+)/v5hisBHBx作为载体,通过脂质体转染将X基因导入肝癌细胞Bel7404细胞系中,用G418筛选获取稳定表达HBx蛋白的阳性克隆,并观察HBx对肝癌细胞Bel7404增殖、凋亡及细胞周期的影响,为进一步探索HBx与HCC之间的关系提供更为完善的理论依据,希望能为肝细胞癌的预防、诊断及治疗提供新的策略。1材料与方法1.1材料14EffecteneTransfectionReagent(Qiagen);G418
此文档下载收益归作者所有