乙型肝炎病毒x基因对肝癌细胞bel7404细胞周期的影响

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1、乙型肝炎病毒X基因对肝癌细胞Bel7404细胞周期的影响作者：林松挺1,陈正义，陈莹晖,程斌【摘要】目的：构建转基因细胞株Bel7404/HBx,研究HBx对肝癌细胞周期及凋亡的影响，为探索HBx与原发性肝细胞癌（HCC）之间的关系提供更为完善的理论依据。方法：运用脂质体转染及G418筛选获取Bel7404/HBx阳性克隆，并分别用聚合酶链反应（RTPCR）和Westernblot鉴定HBxmRNA与蛋白的表达，进一步用四唑兰比色实验（MTT）检测Bel7404/HBx的增殖，流式细胞仪（FCM）检测Bel7404/HBx的细胞周期及凋亡。结果：成功构

2、建Bel7404/HBx，MTT检测结果表明Bel7404/HBx生长速度加快，流式细胞仪检测结果显示,与对照组细胞相比,Bel7404/HBx凋亡率明显降低（P<0.05)，G1期细胞比例降低（P<0.05),S期及G2期细胞所占比例增高（P<0.05)。结论:HBx能加速细胞周期进程，从而促进肝癌细胞的生长并抑制细胞凋亡，可能对肝癌细胞恶性程度具有重要的影响。【关键词】HBx；原发性肝细胞癌；聚合酶链反应；免疫印迹；四唑兰比色实验；流式细胞术［ABSTRACT］Objective:Toestablishtransgeniccellline

3、s14Bel7404/HBx,studytheinfluenceofHBxoncellcyclesandapoptosis,andprovidemoreextensivetheoriesforexploringtherelationshipbetweenHBxandhepatocellularcarcinoma(HCC).Methods:TheBel7404/HBxpositivecloneswereobtainedbyLipofectaminetranfectionandG418selection,thenHBxmRNAandproteinweredetect

4、edbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)andWesternblot,respectively.Thetetrazoliumbluecolorimetrictest(MTT)andflowcytometer(FCM)wereusedtomeasureproliferation,cellcyclesandapoptosisofBel7404/HBx.Results:Bel7404/HBxwassuccessfullyestablished.MTTshowedthattheBel7404/HBx

5、grewfasterthanthecontrolgroup（P<0.05),andFCMshowedthatcomparedwithcellsincontrolgroup,theapotosisratesofBel7404/HBxwereatalowlevel,cellsinG1phasedecreasedbutincreasedinSandG2phaseinproportion（P<0.05).Conclusions:HBxcanacceleratecellcycleprogressiontopromotethegrowthofhepatomacel

6、lsbutinhibitapoptosis,whichindicatesthatitmayhavegreatinfluenceonthemalignantdegreeofhepatocellularcarcinoma.14［KEYWORDS］HBx;Hepatocellularcarcinoma;RTPCR;Westernblot;MTT;FCM原发性肝细胞癌(HCC)一直以来是危害人民身心健康的一大疾病，其发病机理多种多样，其中HBV在其发病中一直占据重要的地位。目前研究证实，HBV中最小的阅读框X基因在HCC发生中所起的作用至关重要，但各家研究结论不太一致，有

7、的结论甚至互为矛盾，这也使得HBx致癌机理尚未研究清楚。因而，HBx致HCC机理仍然是目前研究的热点，为此，我们以重组质粒pcDNA3.1(＋)/v5hisBHBx作为载体，通过脂质体转染将X基因导入肝癌细胞Bel7404细胞系中，用G418筛选获取稳定表达HBx蛋白的阳性克隆，并观察HBx对肝癌细胞Bel7404增殖、凋亡及细胞周期的影响，为进一步探索HBx与HCC之间的关系提供更为完善的理论依据，希望能为肝细胞癌的预防、诊断及治疗提供新的策略。1材料与方法1.1材料14EffecteneTransfectionReagent（Qiagen）；G418