乙型肝炎病毒X蛋白升高细胞内钙离子机制研究-论文.pdf

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1、第43卷第1期第23页华中科技大学学报(医学版)V01．43No．1P．232014年2月ActaMedUnivSciTechnolHuazhongFeb．2O14乙型肝炎病毒X蛋白升高细胞内钙离子机制研究*王君，何生松△，刘亚男，张盼，姚景宏华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科，武汉430022摘要：目的研究乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)调节细胞内钙离子可能的分子机制，揭示乙型肝炎病毒(HBV)诱导肝癌的可能途径。方法培养人胚肾细胞(HEK293)，取第2代HEK293细胞共转染HBx基因、钙释放激活钙通道蛋白1(Orail)基因或者间质相互作用因子1(STIM1)基因，免疫共沉

2、淀(co—IP)实验观察细胞内蛋白结合情况，并使用谷胱甘肽巯基转移酶(GST)pull—down实验研究HBx与Orail作用位点，使用钙离子测量／成像系统检测HBx蛋白对细胞内钙离子的影响。结果转染后细胞生长状态良好，co—IP实验结果显示HBx蛋白在坌盯胞内可以与Orail蛋白结合，GSTpull—down实验显示HBx蛋白可以与Orail蛋白C末端结合，钙离子测量／成像系统检测显示HBx蛋白可升高活细胞钙内流。结论HBx蛋白通过与细胞膜钙离子通道Orial结合蛋白的C末端结合，增加细胞钙内流，扰乱细胞内钙离子平衡，从而影响细胞增殖等活性。关键词：HBx蛋白；Orail蛋白；通透

3、性钙池调节离子通道；肝癌中图分类号：R512．06DOI：10．3870／j．issn．1672～0741．2014．01．005TheMechanismofHepatitisBVirusXProteinElevatingCytosolicCalciumSignalsWangJun，HeShengsong△，LiuYa’nanetalDepartmentofInfectiousDisease，UnionHospital，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430022，ChinaAbst

4、ractObjectiveToexaminethepossiblemechanismbywhichHBxproteinregulatestheintracetlularcalciumlev—els．MethodsPlasmidspcDNA—Flag—HBx，pcDNA—HA—Orail。pcDNAHA—STIM1andpEGFP—C3一HBxwereco—transfectedin—toHEK293cells．TheinteractionbetweenSOCcomponentsandHBxproteinwasconfirmedinco—immunoprecipitation(Co—I

5、P)．andtheinteractionof0railproteinwithHBxproteinwasassessedbyusingGlutathioneStransferase(GST)pull—downassays．Single—cellcalciummeasurementsweremadetodeterminetheeffectofHBxproteinonintracellularcalcium1ev—els．ResultsThetransfectedcellsgrewwel1．Co—IPassayrevealedthatHBxproteincouldbindtointrace

6、llularOrailpro—tein．GSTpull—downassayshowedthatHBxproteininteractedwiththeC-terminusofOrail．Subsequentsingle—eelIcalciummeasurementsdemonstratedthatHBxproteincouldincreasethecalciuminfluxofviablecells．ConclusionHBxproteinregu—latesS0CEviadirectinteractionwiththeC—terminusofOrailprotein。andHBxpr

7、oteinmayelevatetheintracellularcalciumlevels。disturbtheintracellularcalciumbalance，therebyinfluencingtheproliferationandotheractivitiesofcells．KeywordsHBxprotein；Orailprotein；Capermeablestoreoperatedchannels；hepatoce儿u1arcarcinoma