AHR小干扰RNA对肝癌HCCLM3细胞体外增殖和体内肿瘤生长的影响-论文.pdf

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1、肿瘤2014年3月第34卷第3期TUMORVo1．34，March2014WWW．tumorsci．org223DOI：10．3781~．issn．1000—7431．2014．03．005Copyright~2014byTUMOR基础研究·BasicResearchAHRd~干扰RNA对肝癌HCCLM3细胞体外增殖和体内肿瘤生长的影响陈艳美，姜燕复旦大学生物医学研究院系统生物学实验室，上海200032[摘要】目的：探讨RNA干扰(RNAinterference，RNAi)芳香烃受体(arylhydrocarbonre

2、ceptor，AHR)基因表达对肝癌HCCLM3细胞增殖和迁移的影响及其可能的作用机制。方法：将月R基因特异性小干扰RNA(smallinter~erenceRNA，siRNA)转染人肝癌HCCLM3细胞后，应用实时荧光定量一PCR法检测AHRmRNA的表达水平，蛋白质印迹法检测AHR和应激激活的蛋白激酶(stress—activatedproteinkinase，SAPK)／c-JunN一末端激酶(c-JunN—terminalkinase，JNK)、细胞外信号调节激酶1／2(extraceUularsignal—r

3、egulatedkinase1／2，ERK1／2)和c-Jun蛋白及其磷酸化水平，CCK一8(cellcountingkit一8)法和Transwell法检测AHR—siRNA转染后对HCCLM3细胞增殖和迁移能力的影响。合成AHR基因特异性小发夹RNA(smallhairpinRNA，shRNA)，构建稳定干扰AHR基因表达的重组病毒载体pMKO．1／puro—shAHR，并将其感染HCCLM3细胞，感染后的细胞接种于裸鼠皮下建立移植瘤模型，观察移植瘤的生长情况；蛋白质印迹法检测pMKO．1／puro—shAHR感染

4、后HCCLM3细胞及裸鼠皮下移植瘤组织中AHR蛋白的表达水平。结果：AHR—siRNA转染组HCCLM3细胞中AHRmRNA和蛋白的表达水平明显下降(P<0．01)，细胞的增殖和迁移能力受到抑制(P<0．01)；SAPK／JNK、ERK1／2和c-Jun的磷酸化水平降低(P<0．O1)。pMKO．1／puro—shAHR感染后的HCCLM3细胞裸鼠皮下移植瘤体积和质量明显低于对照组(pMKO．1／puro—shNC感染HCCLM3细胞)(P<0．01)，pMKO．1／puro—shAHR感染后的HCCLM3细胞及裸鼠皮

5、下移植瘤组织中AHR蛋白的表达水平降低(P

6、orgrowth／nvivoCHENYan—mei。IlANGYanLaboratoryofSystemsBiology，InstitutesofBiomedicalSciences，FudanUniversity，Shanghai200032，China[ABSTRACT]Obiective：ToinvestigatetheeffectofaryIhydrocarbonreceptor(AHR)RNAinterferenceonhepatomaHCCLM3celIproIiferationandmigrationan

7、dtoexploreitspossiblemechanism．Methods：AfterHCCLM3celIstransfectionwithspecificAHR—smalIinterferenceRNA(siRNA)。theexpressionleveIofAHRmRNAwasdetectedbyreal—timefluorescencequantitative—PCR，andtheexpressionIevelsofAHR。stress—activatedproteInkinases(SAPK)／c_JunN-t

8、erminaIkinase0NK)，extraceIluIarsignal—regulatedkinase1／2(ERK1／2)andc—Junph0sph0rylati0nweredetectedbyWesternblotting．ThentheproIiferationandmigrationofHCCLM3cellsafte