密码子优化型鸭甲肝病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达-论文.pdf

《密码子优化型鸭甲肝病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国动物传染病学报2014，22(1)：1-8ChineseJouma1ofAnimalInfectiousDiseases·研究论文·密码子优化型鸭甲肝病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达李传峰，陈宗艳，孟春春，梁瑞英，胡文，刘光清(中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241)摘要：为了提高基因A型鸭甲肝病毒(DuckhepatitisAvirus，DHAV)VP1基因在昆虫细胞中的表达水平，本研究根据昆虫细胞密码子偏爱性对野生型DHAVVP1(wtVP1)基因进行改造，合成了optiVP1基因，并利用Bac．to．Bac表达系统构建了重组

2、杆状病毒rBacmid—wtVP1和rBacmid．optiVP1分别转染对数生长期的sf9昆虫细胞表达VP1蛋白。转染72h后，sf9细胞出现典型的细胞病变(cytopathiceffect，CPE)，Western—blot和间接免疫荧光法(indirectimmunofluorescenceassay，IFA)检测结果表明VP1蛋白在重组杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得了良好表达。用ImageJ软件对Western．blot扫描的图片进行灰度分析发现，optiVP1基因在昆虫细胞中的表达水平明显高于wtVP1。本研究为进一步研制诊断抗

3、原和新型基因工程疫苗的开发奠定了基础。关键词：鸭甲肝病毒；VP1；重组杆状病毒；密码子优化中图分类号：$852．659．6文献标志码：A文章编号：1674—6422(2014)01．0001．08ENHANCEDEXPRESSIONOFCODON．OPTIMIZEDVPlGENEoFDUCKHEILTITISAVIRUSININSECTCELLSLIChuan—feng，CHENZong—yan，MENGChun—chun，LIANGRui—ying，HUWen，LIUGuang-qing(ShanghaiVeterinaryResearch

4、Institute,CAAS,Shanghai200241，China)Abstract：TheobjectiveofthepresentstudywastoenhanceexpressionlevelofVP1geneofDuckhepatitisAvirus(DHAV)genotypeAininsectcellsbymanipulatingthecodonusagebias．Thecodonusageofwild—typeDHAVVP1(wtVP1)genewasoptimizedanddesignatedasoptiVP1．Therec

5、ombinantrBacmid—optiVP1andrBacmid—wtVP1plasmidswerethenconstructedusingtheBac—to—Bacbaculovirusexpressionsystem(BEVS)andthentransfectedtosf9insectcellsatlogarithmicphaseforexpressionofVP1protein．Thetypicalcytopathiceffectwasobservedinsf9cellsat72hposttransfection．Theexpress

6、ionofVP1proteininsf9cellswasconfirmedinWesternblottingandindirectimmunofluorescenceassay(IFA)．TheVP1amountsonWesternblottingweremeasuredusingthesoftwareImageJ．TheexpressionlevelofoptiVP1genewassignificantlyincreasedascomparedwithwtVP1gene．Thisstudyprovidedabasisfordevelopme

7、ntofdiagnosticreagentsandgeneticallyengineerednovelvaccinesforDHAV．Keywords：DuckhepatitisAvirus；VP1；recombinantbaculovirus；codonoptimization收稿日期：2013-10-30基金项目：国家自然科学基金项目(31101848)；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2012JB13)；公益性行业(农业)科研专项(2(11()03012)；国家高技术研究发展计划(863)项目(2011AA10A200)作者简介

8、：李传峰，男，博士，助理研究员，主要从事水禽病毒病分子生物学研究通信作者：刘光清，E—mail：liugq@shvri．ac．cn中国动物传染病学报2014年2月根