荧光分析法在药物分析中的应用

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1、荧光标记法在药物分析中的应用及小动物活体成像技术在药物研发领域的应用概述：发光分析是分子发光光谱分析的简称化学发光分析（包括生物发光）分子荧光分析分子磷光分析荧光分析法在药物分析中的应用20世纪70年代以来，特别是近年来相继出现的各种灵敏度高的荧光分析法已有效地用于药物制剂以及生物体液中药物的分析。如同步扫描荧光技术可用于违禁品中苯丙胺和吗啡加奎宁的测定；荧光偏振免疫分析法可用于血清中的庆大霉素、地答新、茶叶碱、五巴比妥、苯巴比妥等多种药物的检测，还可进行烧伤患者体内萘替米星的药代动力学研究；特异性荧光偏振免疫法可用来监测肾移植后环孢素A的全血浓度；荧光猝灭法用来测定

2、苦参碱和氧化苦参碱的含量；固体表面荧光测定法用于血清中茶叶碱，以及其它多种抗菌药、抗气喘病药、抗惊风病药等的临床荧光分析；电解荧光光度法测定片剂中卡马西平的含量等等。其中，荧光探针技术已经发展成为借助荧光显微镜在分子水平上进行实时检测的重要手段。这种技术灵敏度高，可视性强，而且对研究的生物大分子或细胞干扰少，因此得到广泛应用。荧光分析法的特征：荧光发射光谱的形状与发射波长无关斯托克位移在溶液光谱中观察到的荧光发射光的波长总是大于激发光的波长。改变不同的激发波长，同一荧光物质的发射光谱形状不变。灵敏度高一般比紫外-可见吸收光谱法高2-4个数量级。操作简单取样量少、重现性

3、好。一该物质必须具有与所照射光线相同频率的吸收结构；二该物质吸收了与其本身特征频率相同的能量之后，必须具有一定的荧光量子产率。常规的荧光分析法可分为直接荧光测定法和间接荧光测定法。直接荧光测定法是利用物质自身发射的荧光进行定量测定，而物质分子自身产生荧光必须具备两个条件:几种常用于药物分析的荧光分析法：直接荧光分析法适用于自身能产生荧光的物质，便可通过药物的荧光强度变化来测定其浓度和含量。因荧光性质与溶液的pH值有关，所以研究体系荧光强度的测定须在适宜的介质溶液中进行，pH对体系荧光强度的强弱影响甚大。已用于直接荧光分析法测定的药物有盐酸洛呱丁胺、双水杨酸等。直接荧光

4、法对于有些药物的测定可以利用其对某一特定的有荧光性的体系的荧光淬灭作用对其进行定量分析和测定。庞志功等建立了测定苦参碱和氧化苦参碱的荧光分析方法。荧光淬灭法还用于对梭基苯丙酮酸、司帕沙星、甲硝哇等药物的含量进行分析。荧光淬灭分析法日常生活中，大部分药物没有荧光性。衍生化荧光分析就是借助化学反应将待测的某种药物接上某种特定的化学基团，去掉某种化学基团，或者改变某种特定基团，己达到改变待测药物的物质结构，从而改变待测药物的荧光特性之目的，提高待测物灵敏度的分析方法。衍生化荧光分析法有些有机配体与金属离子形成的配合物能产生刚性平面结构，这种结构的物质能发射荧光。而我们平常用

5、的药物很多都含有有机配体，所以可以通过改变有机配体的结构而达到改变药物结构的目的。这些配体绝大多数为芳香族化合物：例如-OH，-NH2，-SH，-COOH，-OR，-O，-NR3等，这些官能团能与金属离子形成稳定的五元或六元环配合物。利用金属络合的反应进行衍生氧化还原反应是还原剂将电子转移给氧化剂，其结果是有机物质分子结构发生改变，使其产生荧光或荧光强度增强。利用氧化还原反应进行衍生有时利用荧光分析法在药物测定过程中，需要使用具有刚性平面结构的芳香族化合物或者结构类似的杂环化合物作为荧光衍生剂。这些荧光衍生剂与有机物的活性基团(如羟基、氨基、羧基)发生反应，使反应体系

6、的荧光性增强，或产生荧光产物。例如：利用NBD-F与青霉素反应产生荧光，而测定青霉素的含量。另外，荧光衍生化反应还可以与色谱技术连用来测定一些药物的含量。例如：Gholamreza利用此方法检测阿其霉素、加巴喷定、托吡酯。利用荧光衍生剂进行衍生胶束增敏荧光分析法是在胶束溶液中对药物的含量进行测定的荧光分析方法。表面活性剂的作用之一是在溶液中产生胶束环境，胶束环境对物质分子有如下作用:(l)胶束环境对分子极性较小的弱荧光物质具有一定程度的增溶作用，所以对于此类物质，可用表面活性剂作为增溶剂;(2)胶束环境对有一定荧光性质的物质分子的荧光发射具有增敏增稳作用，因此，对于此

7、类物质，可用表面活性剂对其作用，使其起到增敏增稳的效果。综合以上分析，对于某些几乎没有荧光性或荧光性很弱的药物用直接荧光方法无法进行分析测定时，可以通过使用表面活性剂产生胶束环境，从而使该药物的荧光强度得到一定程度的增强。胶束增敏荧光分析法常用的环糊精(cyclodextrin，CD)就是一种可以产生胶束环境的物质，它是环状低聚葡萄糖类化合物，其结构分子内腔属于疏水性的，结构分子外腔属于亲水性的。由于该物质结构分子主客体的特征，以及该物质所处环境的温度、物质结构表面所带的电荷及该物质分子周围其它分子和离子等所形成的微环境有利于该物质形成胶束环境，胶束