T细胞淋巴瘤化疗耐药中的作用及其机制研究.pdf

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Aug；49(8)·1039·环氧化酶．2表达在NK／T细胞淋巴瘤化疗耐药中的作用及其机制研究王亚民，顾康生摘要目的探讨环氧化酶_2(COX-2)的表达导致NK／T被认为是肿瘤细胞抗凋亡的主要机制之一，影响肿细胞淋巴瘤细胞株化疗耐药的可能机制。方法MTS法检瘤细胞对化疗的敏感性。为探讨NK／T细胞淋巴瘤测表阿霉素、COX-2抑制剂塞来昔布及Akt信号通路抑制剂耐药的机制，该研究拟采用化疗药物表阿霉素诱导LY294002对NK／T淋巴瘤细胞株YTS的生长影响。West

2、ernNK／T淋巴瘤细胞株YrI'S，获得高表达COX．2细胞blot检测表阿霉素作用后COX一2的表达情况，高表达COX-2株并进行分组研究，检测p-Akt、Bax、Bcl一2、Mcl一1表YTS细胞分成表阿霉素组、表阿霉素联合塞来昔布(20达和细胞存活率；探讨p-Akt信号通路和细胞凋亡txmol／L)组及表阿霉素、塞来昔布(20txmoL／L)联合LY294002(25txmolfL)组进行比较，Westernblot检测Akt、途径在COX．2高表达的NK／T细胞淋巴瘤化疗耐p-Akt、Bax、Bcl-2、Mcl一1表达情况，MTS检测细胞存活率

3、，流药中的作用及可能机制。式细胞仪检测细胞的凋亡变化。结果表阿霉素、塞来昔1材料与方法布、LY294002对的生长均具有细胞毒作用，并呈剂量依赖性。表阿霉素可以诱导YTsCOX一2的高表达，且呈剂1．1材料人NK／T淋巴瘤细胞株YTS由郑州大量依赖性。与未被诱导细胞相比，COX一2高表达的细胞株学第一附属医院张明智教授馈赠；1640培养基购白对表阿霉素的耐受性提高，Westernblot结果显示Bcl一2、Mc1．赛默飞世尔生物化学制品(北京)有限公司；表阿霉1和p-Akt蛋白表达升高，Bax蛋白表达降低。COX-2高表素、塞来昔布购自美国辉瑞公司；LY

4、294002购自美达YTS细胞分成表阿霉素组、表阿霉素联合塞来昔布(20国Sigma公司；COX-2单抗和Bax、Bcl-2、Mcl一1、Akt、~mol／L)组及表阿霉素、塞来昔布(20I~mol／L)联合p-Akt单抗购自美国BioworldTechnology公司；B-ac—LY294002(25trmol／L)组进行比较，细胞存活率依次降低；凋亡率依次升高；Bax表达依次升高；p-Akt、BCl-2、Mcl-1表tin、鼠／兔二抗均购自北京中杉金桥公司；Marker和达依次降低。结论表阿霉素可诱导NK／T淋巴瘤细胞株发光剂购自美国ThermoSc

5、ientific公司；BCA蛋白定YTSCOX-2表达，高表达COX一2细胞株可能通过p-Akt信量试剂盒购自原平皓生物技术有限公司。号通路介导细胞凋亡途径提高对表阿霉素的耐受性。1．2方法关键词环氧化酶-2；凋亡；Akt；表阿霉素；NK／T淋巴瘤细1．2．1细胞培养人NK／T淋巴瘤细胞株YTS接胞株YrI’S种于含10％胎牛血清，1％非必须氨基的1640培养中图分类号R733．4基中，37℃、5％CO饱和湿度培养箱中常规培养，3文献标志码A文章编号1000—1492(2014)08—1039—06～4d传代。1．2．2不同剂量表阿霉素对YTS细胞生长的

6、影响环氧化酶一2(Cyclooxygenase-2，COX一2)是前列取对数生长期的细胞(细胞数为10×10／m1)，每腺素合成过程中的一个重要限速酶，研究表明在孔90l接种96孔板，分别加人含表阿霉素(0、鼻型NK／T细胞淋巴瘤患者中，COX-2表达可以作3．33、6．66、9．99、1．32、1．67mg／L)培养液，终液量为治疗反应不佳的预后因子，提示COX．2在该类型100l／，孔，并设等量PBS孔调零。培养24h加人淋巴瘤肿瘤对化疗的耐受性方面发挥重要作用；而MTS2Ol，继续培养4h，酶标仪检测450nm波长化疗耐药的一个重要原因是肿瘤对凋亡

7、诱导的耐处的吸光值(A)。受，其中磷脂酰肌醇_3激酶／蛋白激酶B(phosphati—1．2．3不同剂量塞来昔布对YTS细胞生长的影响dylinositol3-kinase／Akt，PI3K／Akt)信号通路的激活取对数生长期的细胞(细胞数为10×10／m1)，每2014—02—25接收孔90l接种于96孔板。将含塞来昔布(0、20、40、基金项目：安徽省高校省级自然科学研究项目(编号：KJ2011Z164)60、80、100~mol／L)的培养液加入接种于96孑L板的作者单位：安徽医科大学第一附属医院肿瘤科，合肥230022YTS细胞。终液量100l／

8、，孔，并设等量PBS孔调作者简介：王亚民，男，硕士研究生；顾康生，男，教授，硕士