化疗药物富集小鼠乳腺癌细胞系4t1中肿瘤干细胞与其耐药机制的研究

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3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯·······29小结··⋯·····⋯··········⋯···⋯··⋯·⋯··⋯··⋯⋯⋯⋯········⋯⋯⋯·32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32第二部分4T1细胞系中肿瘤干细胞耐药机制研究前言⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯·’一··⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯······35刖舌”一”““””⋯一”””一“””⋯“⋯⋯“一“⋯⋯⋯⋯”””⋯⋯一“35材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35结果···············⋯····

4、···⋯⋯··⋯··⋯⋯⋯·⋯⋯⋯···⋯⋯···········41附I訇⋯···········⋯⋯⋯⋯⋯···········⋯⋯··⋯········⋯·····⋯·⋯····43附表·········⋯·················⋯⋯·············⋯⋯··········⋯···········45讨论⋯⋯····⋯···⋯⋯·······⋯·⋯···⋯·····⋯⋯···⋯···················46／J、结·····⋯⋯⋯⋯···⋯·⋯···⋯⋯······

5、·········：⋯··············⋯······48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48综述”一“⋯⋯“”一”·OOO·⋯⋯····⋯·⋯·⋯·⋯····⋯···“··“⋯······50致谢⋯················⋯⋯··············⋯⋯··············⋯················60个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯00OO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6l中文摘要化疗药物富集小鼠乳腺癌细胞系4T1中肿瘤千细胞及其耐药机制研究摘要目的

6、：利用化疗药物富集小鼠乳腺癌细胞系4T1中肿瘤干细胞(cancerstemcell，CSC)，研究肿瘤干细胞的一些耐药机制，为进一步探索乳腺癌干细胞的调控机制、开发靶向乳腺癌干细胞的分子制剂奠定基础。方法：l化疗药富集乳腺癌干细胞动物模型的建立。收集对数生长期4T1细胞，接种于BALB／c小鼠右肩胛部皮下，建立小鼠乳腺癌模型。将小鼠随机分为4组，分别为对照组和5．氟尿嘧啶(5-Fu)低、中、高浓度处理组。待小鼠成瘤后，对照组给予生理盐水，5．Fu处理组分别给予低、中、高浓度(O．05mg／ml、0．1m

7、g／ml、0．2mg／m1)5．Fu腹腔注射，每天一次，共用七天，七天后改为一周一次，四周后引颈处死小鼠，将肿瘤组织分为三份，一份以中性甲醛固定进行免疫组化检测，一份用于RNA提取，二份制成细胞悬液用于流式检测CD44+CD24√low细胞比例和Hoechest33342染色检测侧群(sidepopulation，SP)细胞比例。取CD44+CD24卅0w细胞比例最高的5．Fu处理组小鼠肿瘤组织，制备细胞：悬液，建立第二代富集CSC的小鼠移植瘤模型，荷瘤小鼠用相同浓度5．Fu化疗，用药方法同前，如此传代

8、共制作四代小鼠移植瘤模型。2采用流式细胞技术(flowcytometry，FCM)检测各代对照组和5一Fu处理组小鼠移植瘤模型肿瘤组织中CD44+CD24卅0w细胞的比例。3采用Hoechst33342染色法检测各代对照组和5．Fu处理组小鼠移植瘤模型肿瘤组织中SP细胞比例。4免疫组化法检测各代对照组和5．Fu处理组小鼠移植瘤模型肿瘤组织中CD55和ALDHl蛋白的表达。5观察无血清培养各代对照组和5．Fu处理组小鼠移植瘤组织细胞微球体的形