应激引起不同年龄、性别和种类小鼠免疫器官退化的比较研究.pdf

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1、北京大学学报（自然科学版），第36卷，第5期，2000年9月ActaScientiarumNaturaliumUniversitatispekinensis，Vol.36，No.5（Sep，2000）应激引起不同年龄、性别和种类小鼠免疫器官退化的比较研究肖健张晏耿晓峰（北京大学心理系，北京，100871）吴振宇王勒渝（北京广安门医院基础医学研究室，北京，100053）摘要以警告信号加足底电击的方式（简称信号电击）对不同年龄、性别和种类小鼠进行应激，每天24min，共7d。结果发现，应激后免疫器官退化，重量减轻，而且这种变化与年龄和性别有关。胸腺退化，年龄大的

2、鼠比年龄小的鼠更明显，而脾脏则相反，年龄小的鼠更敏感。另外，胸腺的退化雄性要高于雌性，而脾脏则没有性别上的差异。从种类上看，Swiss鼠比Balb／c鼠更敏感。对淋巴结来说，这种退化没有表现出年龄、性别和种类的差异。此外，应激使胸腺、脾脏内的淋巴细胞总数和骨髓内淋巴细胞的比例减少。这一结果说明，胸腺和脾脏的退化，不是由于组织内体液的减少，而是胸腺和脾脏内淋巴细胞绝对数减少之故。关键词应激；胸腺；脾脏；骨髓；退化中图分类号B845!引言人们都知道，应激对健康有负性影响，它在许多疾病的发生和发展中起重要作用［1，2］。目前认为应激的影响是通过激素和免疫系统作为中

3、介的，通常情况下，它引起免疫功能的降低［3］。应激引起免疫器官退化最明显的是胸腺。有报告指出，很多类型的应激都引起胸腺退化，原因是在应激条件下，糖皮质激素大量分泌，使胸腺内对皮质酮敏感的胸腺细胞凋亡增加［4］。在研究应激对胸腺或其他免疫器官的影响时，应考虑到年龄的因素，因为胸腺的退化在生命的早期就开始，以后随着年龄的增加逐渐减小。性别也影响免疫器官的大小，这可能通过性激素的作用，因为免疫细胞内有性激素的特异受体［5］。另外，胸腺内的T-淋巴细胞是由骨髓内的前T细胞经血流进入胸腺，在胸腺内继续发育而成的。在应激过程中，骨髓输出的前T细胞是否减少，从而造成胸腺的

4、退化。因此，本文以不同年龄、性别和种类的小鼠为材料，研究它们的免疫器官在应激中的变化情况以及骨髓中淋巴细胞的比率，探讨应激引起免疫器官退化的生理机制。1）北京大学自然科学预研基金资助项目收稿日期：2000-01-12；修回日期：2000-02-21726北京大学学报（自然科学版）第36卷1材料和方法1.1动物以SWiss（购于计生所动物中心）和Balb／c（购于北医大实验动物部）2种小鼠288只作为实验动物，雌雄各半，年龄到实验结束时分别为48，74，164和365d（天）。按雌雄和年龄的不同分别饲养在不锈钢制鼠笼中。同前，动物保持在最小应激条件下，光照12

5、1，温度26!30C，食物和水自取。1.2实验程序实验时将SWiss和Balb／c小鼠分别按年龄和性别的不同随机分成16个组，每组再分实验组（10只）和对照组（8只）。实验组每天进行24min的应激实验。对照组不给应激，只在反应箱中呆上相同的时间。应激方法采用警告信号加足底电击的模式，即以清晰但不刺耳的咔嗒声（4次／s）为声音刺激，50V交流电为足底电击。实验时，先将动物放入反应箱内适应3min，然后呈现声音刺激10s，接着伴随5s的足底电击，电击呈现的时间是随机的，有时声音过后，立即给予电击，有时5，10，30s甚至1，2min后给予电击。声音呈现的时间间

6、隔为3min，每天［6（］1988）专门进行了研究，发现大鼠在有8次，共24min。对于这种应激模式，Mormede等人警告信号的电击和无信号的电击作用下，以刀豆蛋白A（ConA）刺激的淋转反应存在显著差异，有警告信号电击组淋转反应降低的更多。他们认为这种应激模式，心理应激成分比较多，动物听到警告信号后，知道马上要挨电击，但何时电击又不能预测，因此心理处于一种恐惧、紧张状态，它的应激强度比有规律的无信号电击要大。我们采用这种应激方式，每天给动物应激24min，共7d，最后一次应激后将实验组和对照组动物同时处死，分别称取体重、胸腺、脾脏和腋下淋巴结的重量。1.

7、3淋巴细胞总数的测量称重后的胸腺、脾脏和淋巴结加2mL生理盐水研磨，分别装入2个试管中，每管1mL。骨髓细胞用生理盐水冲洗股骨和胫骨，所得悬液也分别装入2管中，每管1mL。然后每管加6mLTris-N~4Cl溶液，10min后离心5min（1000r／min），弃上清液加5mLPBS离心5min（1000r／min），并重复1次，弃上清液分别加2mL单克降抗体，避光染色30min，各加1mLPBS离心5min（1000r／min），弃上清液，再加1mLPFA，用流式细胞仪（FACSORT，美国BECTONDICKNSON公司生产）计数，并自动打印出结果。1.

8、4统计所有数据用SPSS／PC软件统计。显著性检验用