农业微生物实验指导1--4

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1、农业微生物学实验指导北京农学院食品科学系授课教师刘一倩高秀芝2006年3月实验1显微镜的使用及细菌形态的观察1目的要求(1)了解普通光学显微镜的构造，各部分的功能和使用方法。(2)学习并掌握油镜的原理和使用方法，熟悉几种常见微生物的基本形态。2普通光学显微镜的构造与油镜的工作原理2.1普通光学显微镜的构造显微镜的构造可分为机械装置和光学系统两大部分。机械装置包括镜座、镜筒、镜臂、物镜转换器、载物台、推进器、粗调螺旋、微调螺旋、光圈等部件；光学系统由接目镜、接物镜、聚光器、反光镜等组成(图1-1)。(1)镜座镜座是显微

2、镜底座，用以支撑全镜，呈长方形。其上装有电源开关、照明光源、保险丝、光源滑动变阻器等。(2)镜筒镜筒上连接目镜、下连接转换器，光线从筒中通过。安装目镜的镜筒分为可调式的单筒和固定式的双筒两种。从镜筒上缘到物镜转换器螺旋口之间的距离称为筒长。国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。(3)镜臂连接镜筒和镜座。有的镜臂是固定的，有的可向后方倾斜，其作用是支撑镜筒、载物台、聚光器和调焦装置等。(4)物镜转换器转换器上可安装3～5个物镜，一般是3个物镜(低倍镜、高倍镜、油镜)。转动转换器时，可以按需要调

3、换各种物镜，将之推到使用位置上。图1-1光学显微镜构造示意图1.物镜转换器；2.物镜；3.游标卡尺；4.载物台；(5)载物台载物台呈长方形，中央有一5.聚光器；6.虹彩光圈；7.光源；8.镜座；9.电源孔，为光线通路。在台上装有弹簧标本夹和推开关；10.光源滑动变阻器；11.粗调螺旋；12.微调进器。螺旋；13.镜臂；14.镜筒；15.目镜；16.标本移动(6)推进器推进器由一横一纵两个推进螺旋齿轴和齿条构成，转动其上螺旋，可使标本片向前、后、左、右移动。研究型显微镜的纵横架杆上刻有刻度标尺，构成精密的平面坐标系。如

4、需要重复观察已检查标本的某一物像时，可在第一次检查时记下纵横标尺的数值，下次按数值移动推进器，就可以找到原来标本的位置。(7)粗调螺旋粗调螺旋用于粗放调节物镜和标本的距离。老式单目镜显微镜的粗调螺旋向前扭动，镜头下降接近标本。新式双目镜显微镜(如Motic显微镜)镜检时，双手向后扭动使载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本远离物镜。使用显微镜观查标本时，主要使用粗调螺旋调节。(8)微调螺旋用粗调螺旋只能粗放地调节焦距，难于观察到清晰的物像，因而需要用微调螺旋做进一步调节。其每转一周，镜筒移动0.1mm。新式研究

5、型显微镜粗、微螺旋为共轴式。原则上，微调螺旋每次旋转不超过一周。(9)光圈在聚光器下方，可任意开闭，用来调节射入聚光器光线强弱。(10)接目镜目镜作用是将物镜放大了的实像进行第二次放大，形成虚像并映入眼帘。不同的目镜上刻有5×、10×、15×等字样，以表示该目镜的放大倍数。普通光学显微镜常用的目镜主要是惠更斯目镜。研究型显微镜配有性能更好的目镜，如补偿目镜(K)、平场目镜(P)和广视场目镜(WF)等。照相时选用照相目镜(NFK)。(11)接物镜物镜安装于转换器上，入射光线通过物镜时使被检物像形成第一次放大的实像。普通

6、显微镜装有低倍镜(10×)、高倍镜(40×)和油镜(100×)三种消色差物镜，外壳上标有“Ach”字样，通常与惠更斯目镜配合便用。使用低倍镜和高倍镜时，物镜与标本间的介质是空气，称之为干燥系物镜。；而使用油镜时，物镜与标本间的介质是香柏油，称之为油浸系物镜。油镜标有HI或Oil字样及镜头下缘刻有白环或红环。检查细菌标本要用油镜。研究型显微镜配有性能更好的物镜，如复消色差物镜(Apo)、平场物镜(Plan)、平场消色差物镜(PlanAch)、平场复消色差物镜(PlanApo)等。(12)聚光器由聚光透镜、升降螺旋和能调

7、节开孔大小的虹彩光圈组成，装在载物台下面，可通过升降螺旋而起落。其作用是将光线聚光于标本之上，增强照明度。普通光学显微镜配置的都是明视场聚光器，分为阿贝聚光器、齐明聚光器和摇出聚光器三种。研究型显微镜(如MoticBA400显微镜)配有性能更好的消色差摇出式聚光器，能将聚光器上透镜从光路中摇出，满足低倍物镜(4×)大视场照明的需要。齐明聚光器虽质量最好，但不适于4倍以下的物镜。(13)反光镜早期普通光学显微镜常用自然光检视标本，在镜座上装有反光镜，由平凹两面镜子组成。光线较强时用平面镜，光弱时用凹面镜，可自由旋转方向

8、，以将最佳光线反射入聚光器。新式研究型显微镜镜座上装有光源，并由电流调节螺旋来调节光照强度。2.2油镜使用的工作原理在显微镜的光学系统中，物镜的性能直接影响显微镜的分辨率。与其他物镜相比，油镜的放大倍数最大，使用也比较特殊，需在载玻片与镜头之间滴加香柏油，这主要有如下二方面的原因：(1)增加照明亮度油镜的放大倍数虽然可达100×，但因焦距很短，