微生物实验指导全文

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1、微生物实验指导全文实验一显微镜的使用微生物的个体很小，必须用放大倍数高的、结构精密的显微镜，才能了解其个体的形态特征及特殊的繁殖方式。因此，显微镜是学习微生物的重要工具，只有正确并熟练地掌握显微镜的使用方法，才能研究和观察微生物的形态。本实验通过观察细菌的染色涂片标木，重点练习和掌握油镜的使用方法。一、器材准备1＞具油镜头的显微镜。2、细菌染色涂片标本若干片。3、香柏油、二甲苯和擦镜纸。二、显微镜的构造1、机械部分显微镜的机械部分包括镜座、镜身、镜筒、载物台、物镜转换器、推进器、粗和细调螺旋等。2、光学部分：光学部分包括目镜、物镜、聚光镜、虹彩光圈、

2、反光镜等。三、显微镜的性能显微镜的总放大倍数等于物镜放大率和目镜放大率的乘积。但显微镜性能优劣，不只是视其放大倍数的高低，而更主要是视其辨晰细微结构的能力，即性能良好的显微镜必须使观察的物体放人倍数高，而且清晰。显微镜辩析细微结构的能力可用分辨率表示。其能够辨晰的细微结构愈小，则分辨率愈高，分辨率的高低，首先取决于物镜的性能，其次为冃镜和聚光镜的性能。若设物镜分辨岀的物体两点间的最短距离为D,则D二光波长度入二二数值口径2N?A入2?nsina2D——物镜分辨出物体两点间的最短距离。入一一光波长度。n——介质折射率。sina2——镜口角半数Z正弦。由

3、上式可见，D值愈小，物镜的分辨率愈高，愈能分辨出物体的细微细构，物象愈清楚。根据上式看出，可通过减低波长、增大介质折射率和加大镜口角三方面来提高分辨率。对于普通光学显微镜，釆用增大介质折射率来提高数值口径，是提高分辨率的可行途径。四、显微镜的使用：显微镜应直立实验台上，不要倾斜，因微生物学镜检过程中，常用水浸片和油浸片，如显微镜台倾斜，将导致水或香柏油流动，影响观察。应将显微镜放止，把低倍物镜旋到镜筒下方，转动粗螺旋，使镜头与载物台距离约0.5cm,上升聚光器，使与载物台表面相距约1.0mm,左眼看着目镜调节反光镜角度，开闭光圈，使视野内得到最佳照明

4、为止。将细菌染色涂片标本置于载物台上，涂片部位放在正中，下降低倍物镜至标本约0.5cm处，观察目镜并调转细螺旋，以获得清晰的物像，再移动推进器，将所观察的部位置于视野屮心。将低倍镜转成高倍物镜，再做进一步调整。经过低倍和高倍物镜的初步观察就能转换成油镜止式观察。油镜放大倍数很高，其工作距离很短，一般只有0.19mm,应特别小心，以免损坏镜头和标本。在使用油镜时，标本上要滴一滴香柏油，再将镜头徐徐下降浸入香柏油中，直到几乎与标本相接触为止。左眼看着目镜，向上转调粗螺旋，观察到模糊标本物像后，改用细螺旋，至标本物象清晰为止。a＞干燥系物镜b、油浸系物镜图

5、1干燥系物镜与油浸系物镜光线通路在使用油镜时加香柏油，是因香柏油的折光率是1.515,接近于玻璃1.52,大于空气的1.0；由于介质的折光率相近，光线折射少，进入油镜的光线增多，物镜的分辨率提高。这样，就能看清检视物了。见图1五、显微镜的保养：油镜使用完后，必须用擦镜纸去擦镜头上的香柏油，再用擦镜纸沾少量二甲苯揩擦镜头，随后用一片擦镜纸将残余二甲苯擦净，否则粘固透镜的胶质会被二甲苯溶液溶解，日久镜片易移位脱落。物镜成“八”字形,紧靠载物台；聚光器放在最低处，反光镜直立，用纱布擦干净各部位并把纱布盖上，放回木箱中。・2・六、细菌形态的观察按油镜的使用方

6、法，每个同学自己动手找出一片染色涂片标木并绘图,其余的涂片，可互相观察或从示范片绘出。七、回答问题1.使用油镜时，为什么要加香柏油？能否用水或其它油代替？（附：一些物质的折光率）香柏油1.515甘油1.475亚麻油1.47冬青油1.536石蜡油1.481空气1.0水1.33松节油1.5242.油镜使用完毕后应注意哪些问题？玻璃1.52丁香油1.535-3-实验二微生物染色（一）一、冃的：学习微牛物的涂片染色的操作技术，掌握微牛物的简单染色，革兰氏染色的基本原理和方法。二、原理：染色是细菌学中一个重要而且很基本的技术，由于微生物与各种不同性质的染料具有

7、一定的亲合力，从而使微生物着色，着色后的菌体折光性弱，色差明显。在显微镜下容易观察细胞的内部结构及其内含物，因此,微生物染色是进行微生物形态观察的重要方法之一。染色分为单染（简单染色），复染（革兰氏染色，抗酸染色），单染较简单，以同一种染料使菌体着色，以显示微生物的形态；复染中的革兰氏染色是一种重要的鉴别染色，利用两种不同性质的染料，即草酸鞍结晶紫和沙黄染液先后染色菌体,当用酒精脱色后，如果细菌能保持草酸技结品紫与碘的复合物的颜色，即呈紫色的细菌叫革兰氏阳性菌；如果草酸鞍结晶紫与碘的复合物被酒精脱掉，菌体染上沙黄的颜色，呈红色叫做革兰氏阴性菌。三、材

8、料与用具：（一）大肠杆菌（Escnerichiacoli）金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaur