微生物实验指导.doc

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1、微生物学实验沈阳农业大学土地与环境学院微生物学教研室编2008年9月98前言微生物学具有前沿性和开拓性，是生命科学最重要组成部分，对生命科学的基础研究和重大发现都起到了决定性的作用。可以说，没有微生物学知识，生命科学的理论和研究技术的建立及发展是不可能的。微生物学实验是微生物学重要组成部分，是微生物学教学的重要内容。近年来，随着微生物学的迅速发展及其在多个领域的不断渗透，无论在理论研究还是在实际应用，尤其是微生物学教学改革的实施，新的培养目标和教学大纲的要求等方面，都要求有更新颖和实用的微生物学实验教材做基垫。编者根据新版教学大纲，以及多年的教学和研究实践，在2002年版教材基础上

2、，针对我校教学实际，对实验内容重新整合、精选，编写了这本《微生物学实验》教学指导教材。本书由沈阳农业大学微生物学教研室全体教师参加编写，由钮旭光、肖亦农、刘灵芝主编统稿，韩梅最后审稿。由于时间仓促，书中谬误和遗漏在所难免，恳请读者批评指正。编者于沈阳农业大学2008年9月98目录实验一普通光学显微镜的构造性能和使用方法2熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能,学习并掌握油镜的原理和使用方法。2实验二细菌的简单染色及观察8实验三细菌的革兰氏染色及观察11实验四放线菌形态观察13实验五真菌形态观察（Ⅰ）15实验六真菌形态观察（Ⅱ）17实验七土壤中各类微生物群体分离及形态观察19实验八

3、微生物大小的测定28实验九微生物数量的测定30实验十水中总大肠菌群的测定——多管发酵法36实验十一昆虫病毒核型多角体的观察40实验十二大肠杆菌生长曲线的测定42实验十三微生物菌种保藏方法44实验十四空气中微生物的计数48实验十五环境条件对微生物的影响51实验十六土壤中纤维素分解菌的分离53实验十七土壤氨化细菌的分离55实验十八豆科植物根瘤中根瘤菌的分离与类菌体的观察57实验十九固定化酵母凝胶粒子的制备及其酒精发酵59实验二十乳酸发酵及酸泡菜中乳酸菌的分离62实验二十一酸奶的酿造及乳酸的快速测定（酶法）64实验二十二糖化曲的制备及测定66实验二十三硝化作用强度的测定70实验二十四反硝

4、化作用强度的测定72实验二十五土壤中磷细菌的分离74实验二十六微生物对硫、铁的转化76实验二十七噬菌体的分离，纯化及效价测定78实验二十八食用菌菌种的提纯复壮80实验二十九香菇菌种的分离纯化82实验三十平菇生产菌种的制作84附录一教学常用菌种86附录二常用试剂及指示剂的配制87附录三常用染色液的配制88附录四常用培养基配方90附录五稀释法测数统计表93附录六大肠杆菌检索表9498实验一普通光学显微镜的构造性能和使用方法一、实验目的熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能,学习并掌握油镜的原理和使用方法。二、实验原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为

5、复式显微镜。它们由机械装置和光学系统两大部分组成。（一）显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件。图1-1光学显微镜的构造及其成像原理1.镜座镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。2.镜筒镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。98从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。

6、国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。3.物镜转换器物镜转换器上可安装3~4个接物镜，一般是三个接物镜（低倍、高倍、油镜）。通常显微镜装有四个物镜。转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。4.载物台载物台中央有一孔，为光线通路。在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。5.推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面座标系。如果我们须重复观察已检查标本的某一部分，在第一次检查时，可

7、记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找到原来标本的位置。6.粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件，老式显微镜粗螺旋向前扭，镜头下降接近标本。新近出产的显微镜（如Nikon显微镜）镜检时，右手向前扭载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本脱离物镜。7.微动螺旋用粗动螺旋只可以粗放的调节焦距，要得到最清晰的物象，需要用微动螺旋做进一步调节。微动螺旋每转一圈镜筒移动0.1mm（100μm）。新近出产的较高档次的显微镜的粗动螺旋和微动螺旋是共