微生物实验指导简章

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1、实验一显微镜构造、使用方法与细菌形态观察一、目的要求1.了解显微镜的构造、性能及成像原理。2.掌握显微镜的正确使用及维护方法。3.观察细菌3种基木形态。二、仪器材料1.显微镜、纱布、绸布、香柏油、二甲苯、擦镜纸2.细菌示教标本片三、普通光学显微镜简介微生物的最显著的特点就是个体微小，必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构。熟悉显微镜并掌握其操作技术是研究微牛物不可缺少的手段。显微镜可分为电子显微镜和光学显微镜两大类。光学显微镜包括：明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、立体显微镜等。其中明视野显微镜为最常用普通光学显微镜，其它显微镜

2、都是在此基础上发展而來的，基木结构和同，只是在某些部分作了一些改变。明视野显微镜简称显微镜。(-)显微镜的构造普通光学显微镜的构造可以分为机械和光学系统两大部分。图1-1显微镜构造1.目镜2.镜筒3.转换器4.物镜5.载物台6.聚光器7.虹彩光圈&聚光镜调节钮9.反光镜10.底座11.镜臂12.标本片移动钮13.细调焦旋钮14.粗调焦旋钮15.电源开关16.光亮调节钮17•光源1.机械系统：（1）镜座Base：在显微镜的底部，呈马蹄形、长方形、三角形等。（2）镜臂Arm：连接镜座和镜筒Z间的部分，呈I员1弧形，作为移动显微镜时的握持部分。（3）镜筒Tube：位于镜臂上

3、端的空心圆筒，是光线的通道。镜筒的上端可插入接目镜，下面可与转换器相连接。镜筒的长度一般为160mm。显微镜分为直筒式和斜筒式；冇单筒式的，也冇双筒式的。（4）旋转器Nosepiece：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。有3〜4个孑L,用于安装不同放大倍数的接物镜。（5）载物台Stage：是支持被检标本的平台，呈方形或圆形。屮央有孔可透过光线，台上有用来固定标本的夹子和标本移动器。（6）调焦旋钮：包括粗调焦钮Coarseadjustmentknob和细调焦钮Fineadjustmentknob,是调节载物台或镜筒上卜•移动的装置。2.光学系统（1）接物镜0bject

4、ivelens,常称为镜头，简称物镜，是显微镜屮最重要的部分,由许多块透镜组成。其作用是将标本上的待检物进行放大，形成一个倒立的实像，一般显微镜冇3〜4和物镜，根据使用方法的差异可分为干燥系和油浸系两组。干燥系物镜包括低倍物镜（4〜10x）和高倍物镜（40〜45x）,使用时物镜与标本之间的介质是空气；油浸系物镜（90〜100x）在使用时,物镜与标木之间加有一种折射率与玻璃折射率几乎相等的油类物质（香柏40/0.652160/0.174油）作为介质。1——放大倍数2——数值口径3—镜筒长度要求4—指定盖玻片厚度（2）接目镜Eyepiecelens：通常称为目镜，一般由2

5、〜3块透镜组成。其作用将曲物镜所形成的实像进一步放大，并形成虚像而印入眼帘。一般显微镜的标准口镜是10xo（3）聚光镜Condenser：位于载物台的下方，由两个或儿个透镜组成，其作用是将由光源来的光线聚成一个锥形光拄。聚光镜可以通过位于载物台下方的聚光镜调节旋钮进行上卜•调节，以求得最适光度。聚光器还俯有虹彩光圈（IrisdiapHragm），此调节锥形光拄的角度和人小，以控制进入物镜的光的量。（4）反光镜：反光镜是一个双面镜，一面是平面，另一面是凹面，起着把外来光线变成平行光线进入聚光镜的作用。使用内光源的显微镜就无需反光镜。（5）光源：口光和灯光均可，以F1光较

6、好，其光色和光强都比较容易控制，冇的显微镜采用装在底座内的内光源。（二）显微镜的成像原理显微镜的放大作用是由物镜和目镜共同完成的。标本经物镜放大后，在目镜的焦平面上形成一个倒立实像，再经目镜进一步放大形成一个虚像，被人眼所观察到（图1・3）。在油镜系屮，载玻片与镜头之间多用香柏油作介质。因香柏油的折射率5=1.51）与玻璃的折射率5=1.52）儿乎相等，故透过载玻片的光线通过香柏油后，直接进入物镜，而不发生折射。两组物镜光线通路的区别如图1・4所示图1・4物镜光线通路图1-3显微镜成像原理（三）显微镜的性能1.分辨率和数值11径衡量显微镜性能好坏的指标主要是显微镜的分

7、辨率，显微镜的分辨率（Resolvingpower）是指显微镜将样品上相互接近的两点清晰分辨出来的能力。它主要取决于物镜的分辨能力，物镜的分辨力是所用光的波长和物镜数值口径的函数。分辨率用镜头所能分辨出的两点间的最小距离表示，距离越小，分辨能力越好。可用公式表示：D=丄丄2N.A物镜的数值口径（Numbericalaperture）,简写为（N.A）：表示从聚光镜发出的锥形光柱照射在观察标木上，能被物镜所聚集的量。可用公式表示：N.A=nsin0n——标木和物镜之间介质的折射率0——由光源投射到透镜上的光线和光轴之间的最大夹角光线投射到物镜的角度越大