中草药饲料添加剂对真鲷幼鱼非特异性免疫的影响

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1、http://www.paper.edu.cn中草药饲料添加剂对真鲷幼鱼非特异性免疫的影响冯剑大连天正实业有限公司(116011)aluard006@sina.com.cn摘要：设计中草药配方分别以1%、2%、3%剂量分粉剂和汁剂的方式添加到基础饲料中，连续投喂真鲷幼鱼（体重22.18±1.44g，体长9.36±0.22cm）2个月。分三个阶段（每20天一阶段）测定鱼体血液中的NBT阳性细胞和血清中的溶菌酶的活力。结果表明，中草药添加剂能够极显著地影响真鲷幼鱼的NBT阳性细胞数和血清中的溶菌酶的活力（p<0.01）。两种添加方式均在第二、

2、三阶段比对照组出现了极显著的差异，且均以2%的添加方式为最佳。关键词：真鲷；中草药添加剂；溶菌酶；NBT阳性细胞；1.引言近年来养殖规模的不断扩大，水产养殖业得到了迅速发展，水产养殖业在世界范围内蓬勃发展的同时，由于高密度集约化养殖、过量投饵等原因，而造成环境恶化，导致各类细菌[1][2]病、病毒病的频繁发生，严重阻碍了水产养殖业的持续健康发展、鱼类、贝类、虾类、蟹类均发生过大面积死亡，尤其某些病毒性疾病的死亡率可达60%-100%，对水产养殖业的[3-7]打击是毁灭性的。在大规模和高密度人工养殖环境下，鱼类等养殖对象对病原的敏感性大大提

3、高，从而易造成传染病的发行和流行。目前已从生理、病理、种质、营养、生态、流[8]行特点等方面进行了大量研究。免疫机制的研究是合理有效防治各类病害的根本和依据。非特异性免疫抵抗机制，包括血清补体、溶菌酶等非特异性体液因子的活动以及巨噬细胞和单核细胞的吞噬活动等，对于鱼体抵抗病原的侵袭和感染具有重要作用。所以增强鱼类非特[9]异性免疫能力，提高整体抗病力是发展水产养殖业的重要手段。作为中华瑰宝的中草药资源十分丰富，尽管已有许多研究表明中草药作为免疫增强剂具有优良的应用效果，但目前渔业生产上的研究应用有限而影响了其在渔业上的推广应用。本试验旨在

4、探讨不同添加方式和不同剂量的中草药饲料添加剂对真鲷幼鱼非特异免疫能力的影响，从而找到一个合理有效的添加方式和添加剂量及用药时间。为真鲷的人工养殖提供理论数据。2.材料与方法2.1材料2.1.1基础饲料组成基础饲料的配方见表1，基础饲料的主要营养概略分析见表2。-1-http://www.paper.edu.cn表1基础饲料主要成分含量（%）Tab1Maincompositionofthebasicdiet(%)组分contents百分含量percentage鱼粉（蛋白质含量约为70%）55豆粕26小麦粉7诱食剂(乌贼粉)5维生素混合物2粘

5、合剂（海藻酸钠）2鱼油1矿物质混合物1三氧化二铬0.2表2试验饲料营养物质的含量（%）Tab2Nutritioncompositionofthetestdiet试验饲料水分蛋白质脂肪碳水化合物灰分testwaterproteinfatcarbohydratecrudeash对照组:C:9.0455.4110.7119.495.35处理组：F1:8.7154.8110.8620.425.20F2:9.0454.6810.6920.015.58F3:8.8154.4210.3621.434.98A1:9.7152.9811.8921.195.

6、23A2:8.5753.8510.7821.195.61A3:9.8654.5610.5619.335.692.1.2药饵的配制将黄芪、党参、当归、枸杞等十种中草药均粉碎为粉末配比混匀，制备成复方中草药粉式添加剂Ⅰ和汁式添加剂Ⅱ，按1%、2%、3%的比例添加到基础饲料中去。制成颗粒，晾干后冰箱保存备用。2.1.3试验鱼与饲养管理试验用鱼为体重22.18±1.44g，体长9.36±0.22cm身体健康，无病害、寄生虫、规格整齐的真鲷幼鱼。将其饲养于大连水产学院农业部海水增养殖生态学与生物技术重点开放实验室的循环式控温水族箱中，试验时每个水槽

7、（80cm*40cm*50cm，实际水量120L）内随机放鱼15尾，驯养一个星期，驯养时每天用基础饲料喂养，每天早晨7点和下午5点投饵，每次投饵前虹吸出粪便，投饵后半小时吸出残饵，水温22±0.5℃，溶氧大于5mg/ml，NH3-N小于0.5mg/L，pH为8.0±0.5。试验开始后，用添加了中草药饲料添加剂的饲料饲养真鲷，饲养跟驯化时一样，收集残饵和粪便并进行纪录。2.1.4溶菌酶试剂盒-2-http://www.paper.edu.cn购自南京建成生物工程研究所2.1.5药品的配制绿化硝基四氮唑蓝（NBT）用无菌生理盐水配制成2g/L

8、。2.2方法2.2.1血清的制备与血细胞的收集在真鲷的臀鳍基部用一毫升的注射器采血，一部分注入离心管中以制备血清，余血用肝素钠抗凝，收集血细胞用以NBT阳性细胞检测。2.2.2NBT阳性细胞的