分级醇沉宣木瓜多糖含量、分子量测定和活性初步研究.pdf

《分级醇沉宣木瓜多糖含量、分子量测定和活性初步研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、第３５卷，第５期光谱学与光谱分析Ｖｏｌ.３５，Ｎｏ.５，ｐｐ１３３１-１３３４２０１５年５月ＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｎｄＳｐｅｃｔｒａｌＡｎａｌｙｓｉｓＭａｙ，２０１５分级醇沉宣木瓜多糖含量、分子量测定和活性初步研究１１，２*１１１３田冰梅，谢晓梅，沈盼盼，杨沫，张圣龙，唐庆九１.安徽中医药大学药学院，安徽合肥２３００１２２.现代中药安徽省重点实验室，安徽合肥２３００１２３.上海市农业科学院食用菌研究所，上海２０１４０３摘要采用水提取分级醇沉制得宣木瓜多糖，利用苯酚-硫酸法测定多糖含量，采用高效尺

2、寸排阻色谱-多角度激光光散射-示差折光联用技术（ＨＰＳＥＣ-ＭＡＬＬＳ-ＲＩ）分析多糖分子量和分子量分布，用多糖体外刺激巨噬细胞，Ｇｒｉｅｓｓ法检测ＮＯ释放量。系列研究旨在考察宣木瓜多糖含量、分子量和分子量分布以及免疫活性，为宣木瓜多糖研究积累实验资料和科学依据；并为中药多糖研究提供较为简单、系统的方法与思路。结果表明，不同乙醇浓度（）沉淀宣木瓜多糖含量的高低φ顺序是：９５％＞８０％＞４０％≥６０％＞２０％，９５％乙醇可较完全地沉淀多糖；当乙醇浓度从２０％上升到９５％时，粗多糖纯度由３５.１％上升至

3、４５.０％。宣木瓜多糖主要有３个色谱峰，不同浓度醇沉的多糖经ＨＰＳＣＥ分离后出峰位置和数量没有明显差别，表明它们含有的４－１４－１多糖种类相似；重均分子量（Mｗ）分别为６.５７０×１０ｇ・ｍｏＬ和１.３９３×１０ｇ・ｍｏＬ以及小于１万未能获得准确值；前两种多糖的分子量分布指数（Ｍｗ／Ｍｎ）分别是１.３３６和１.６３９；本试验中宣木瓜多糖对巨噬细胞Ｒａｗ２６４.７产生ＮＯ没有明显的促进作用。关键词宣木瓜多糖；含量；分子量；高效尺寸排阻色谱-多角度激光散射-示差折光；巨噬细胞；ＮＯ中图分类号：Ｒ２８２文

4、献标识码：ＡＤＯＩ：１０.３９６４／ｊ.ｉｓｓｎ.１０００-０５９３（２０１５）０５-１３３１-０４引言１实验部分宣木瓜是安徽道地药材，已有文献报道木瓜富含多糖类１.１材料与仪器［１］成分。植物多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、木瓜采自安徽省宣城市新田镇，经安徽中医药大学药学［２，３］降血脂及抗衰老等广泛的药理及生物活性。水提醇沉是院彭华胜教授鉴定为贴梗海棠Chaenomelessepciosa（Ｓｗｅｅｔ）［４］天然多糖类最为常用的提取纯化方法，沉淀多糖多采用Ｎａｋａｉ近成熟果实。鲜果采后

5、即置沸水中烫至表皮灰白色，［５］８０％乙醇。ＸＵ氏研究发现用乙醇沉淀天然多糖时需要对对半纵剖，晒干备用。提取材料进行乙醇浓度的优化试验。目前鲜见木瓜多糖提ＤＭＥＭ培养基、ＲＰＭＩ１６４０培养基、胎牛血清为Ｇｉｂｃｏ取、分子量及活性系统研究的报道。本文采用水提分级醇沉公司产品；青霉素、链霉素为Ａｍｅｒｓｃｏ公司产品；小鼠巨噬制得宣木瓜粗多糖；利用苯酚-硫酸法测定多糖含量；用高效细胞株ＲＡＷ２６４.７购自于中国科学院上海细胞研究所；其尺寸排阻色谱-多角度激光光散射-示差折光检测联用（ｈｉｇｈ余试剂均为分

6、析纯，实验用水为纯化水。ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｓｉｚｅｅｘｃｌｕｓｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｃｏｎｎｅｃｔｅｄｔｏ６００型高效液相色谱仪（美国Ｗａｔｅｒｓ公司），示差折光ｍｕｌｔｉ-ａｎｇｌｅｌａｓｅｒｌｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇａｎｄｒｅｆｒａｃｔｉｖｅｉｎｄｅｘｄｅｔｅｃ-仪、多角度激光光散射仪（美国Ｗｙａｔｔ技术公司）；ＵＶ-２５５０ｔｏｒｓ，ＨＰＳＥＣ-ＭＡＬＬＳ-ＲＩ）分析多糖分子量和分子量分布；紫外-分光光度计（日本岛津公司）；ＳｙｎｅｒｇｙＨＴ酶标仪（美用多糖体外刺激巨噬细胞

7、，Ｇｒｉｅｓｓ法检测ＮＯ释放量，初步国Ｂｉｏ-ＴＥＫ公司）。考察其免疫活性。实验结果为宣木瓜多糖的深入研究提供了１.２方法资料和科学依据。１.２.１粗多糖制备收稿日期：２０１４-０７-２８，修订日期：２０１４-１１-０８基金项目：国家“十二五”科技支撑计划项目（２０１１ＢＡＩ０４Ｂ０６）和安徽高校省级自然科学研究项目（ＫＪ２０１２Ａ１８８）资助作者简介：田冰梅，１９８８年生，安徽中医药大学硕士研究生ｅ-ｍａｉｌ：３９４２４３８８４＠ｑｑ.ｃｏｍ*通讯联系人ｅ-ｍａｉｌ：ｘｉｅｘｉａｏｍｅｉ９４０１＠

8、ｓｉｎａ.ｃｏｍ１３３２光谱学与光谱分析第３５卷－１取宣木瓜粉末（过２４目筛）６０ｇ，加石油醚（６０～９０℃）ｍＬ）和阴性对照（ＰＢＳ），３７℃培养４８ｈ；取１００μＬ上清于回流２ｈ，药渣挥干溶剂后按料液比１∶１２加水回流２ｈ，抽９６孔板，加入５０μＬＧｒｉｅｓｓ试剂，室温孵育１０ｍｉｎ，在５４３滤，滤液浓缩，加水成１００ｍＬ，平均分成５份（每份２０.０ｎｍ测定各孔的吸光度值，利用亚硝酸钠溶液标准曲线法计ｍＬ），加入无水乙醇使乙醇体积分数分别为２０％，４０％，算ＮＯ生