溪黄草多糖含量测定与活性研究论文

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1、溪黄草多糖含量测定与活性研究论文【摘要】目的研究溪黄草多糖含量及其对羟自由基的清除作用和抑菌作用。方法从溪黄草中提取精制多糖，测定出溪黄草多糖对葡萄糖的换算因子，用蒽酮硫酸法比色测定计算多糖的含量；采用Fenton反应体系为模型，研究多糖对羟自由基的抑制作用；采用滤纸片法研究多糖的体外抑菌作用。结果溪黄草多糖含量为4.18%，重现性、稳定性和回收率较好；活性测试结果表明溪黄草多糖对羟自由基有较好的清除作用，对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌有一定的抑菌效果。结论溪黄草多糖含量测定方法简单可行，具有一定清除自由基和抑菌活性。【关键词】溪黄草；多糖；含量测定；羟自

2、由基；抑菌作用Abstract：ObjectiveTostudythecontentofpolysaccharidefromRabdosiaserra(Maxim.)Haraanditseffectonhydroxylfreeradicalandantibacteriostaticeffect.MethodsPolysaccharideRabdosiaserra(Maxim.)Hara,anditscontenteasuredbyasamodel.Itsantibacteriostaticeffect.)Harareached4.18%.Ithadi

3、nhibitoryeffectonhydroxylfreeradical，staphylococcusaureusandB.subtili.ConclusionThemethodofmeasuringpolysaccharidecontentissimpleandreliable.Thepolysaccharidehassomeactivities.Key.)Hara；Polysaccharide；Contentdetermination;Hydroxylfreeradical；Antibacteriostaticeffect溪黄草Rabdosiase

4、rra(Maxim.)Hara为唇形科香茶菜属植物.freell，回流脱脂。滤渣挥干溶剂后，加入80%乙醇回流提取2次（1.5h/次）。将滤渣挥干溶剂后加蒸馏水400ml，回流提取1h。取滤液，滤渣再加蒸馏水300ml提1次，将两次所得滤液合并，减压浓缩至一定体积。加入氯仿正丁醇液（4∶1）轻摇，静置取多次，除去蛋白质。水溶液中加入适量活性碳60℃保温30min，过滤，滤液冷却后加入乙醇，使乙醇浓度达85%，放置4℃冰箱中过夜。抽滤，沉淀依次用95%乙醇、丙醇、乙醚各洗3次，真空干燥至恒重，即得精制溪黄草多糖，密封保存备用。2.2样品中溪黄草多糖含量测

5、定2.2.1标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品0.2000g，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度；摇匀，制成2.000mg/ml的标准溶液，然后分别移取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml标准溶液。置于10ml容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀、配成系列标准溶液。2.2.2蒽酮硫酸试液的配制称取0.2000g蒽酮和1.000g硫脲，加入100ml浓硫酸，置于棕色瓶中，混合摇匀至暗处备用（现配现用）。2.2.3标准曲线的绘制分别准确移取系列标准溶液1ml于具塞试管中（各平行3份），以1ml蒸馏水作空白，各加入5ml蒽

6、酮试剂（立即摇匀，置冰水浴中），加完后一起沸水浴8min，取出流水冷却，室温静置10min，于620nm处测定吸光值，以吸光值（A）对葡萄糖浓度（C）作回归处理，得回归方程：A=3.359C－0.01119，r=0.9998。2.2.4换算因子的测定精密称取2.1项下所得精制多糖10mg，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取此液1.0ml置10ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度摇匀作贮备液。精密吸取贮备液2.0ml，用标准曲线项的方法测吸光值，从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖浓度，按下式计算，测得换算因子F＝5.364。换算因子

7、F=g），c为多糖稀释液中葡萄糖浓度mg/ml，d为多糖的稀释因素］2.2.5样品溶液的制备精密称取溪黄草粉末0.5g（过60目筛、平行3份）置三角瓶中，加80%乙醇30ml，回流提取1h，趁热过滤，残渣用热乙醇洗涤（8ml×3次）。残渣连同滤纸置三角瓶中，加入40ml蒸馏水回流提取1h，趁热过滤，残渣用热水洗涤（8ml×3次），洗液并入滤液中，置冷后定容于100ml容量瓶中，摇匀备用。2.2.6样品中溪黄草多糖含量测定精密吸取样品溶液2.0ml同2.2.3项方法操作，测定供试液中葡萄糖含量。按下式计算样品中多糖的含量：多糖含量（%）＝C.D.F/g/m

8、l），D为供试液的稀释因素，F为换算因子，g）］。其结果见表1。表1溪黄草中多糖