溪黄草多糖含量测定与活性研究

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1、溪黄草多糖含量测定与活性研究【摘要】目的研究溪黄草多糖含量及其对羟自由基的清除作用和抑菌作用。方法从溪黄草中提取精制多糖，测定出溪黄草多糖对葡萄糖的换算因子，用蒽酮硫酸法比色测定计算多糖的含量；采用Fenton反应体系为模型，研究多糖对羟自由基的抑制作用；采用滤纸片法研究多糖的体外抑菌作用。结果溪黄草多糖含量为4.18%，重现性、稳定性和回收率较好；活性测试结果表明溪黄草多糖对羟自由基有较好的清除作用，对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌有一定的抑菌效果。结论溪黄草多糖含量测定方法简单可行，具有一定清除自由基和抑菌活性

2、。【关键词】溪黄草；多糖；含量测定；羟自由基；抑菌作用　　Abstract：ObjectiveTostudythecontentofpolysaccharidefromRabdosiaserra(Maxim.)Haraanditseffectonhydroxylfreeradicalandantibacteriostaticeffect.MethodsPolysaccharideRabdosiaserra(Maxim.)Hara,anditscontenteasuredbyasamodel.Itsantib

3、acteriostaticeffect.)Harareached4.18%.Ithadinhibitoryeffectonhydroxylfreeradical，staphylococcusaureusandB.subtili.ConclusionThemethodofmeasuringpolysaccharidecontentissimpleandreliable.Thepolysaccharidehassomeactivities.　　Key.)Hara；Polysaccharide；Contentdete

4、rmination;Hydroxylfreeradical；Antibacteriostaticeffect溪黄草Rabdosiaserra(Maxim.)Hara为唇形科香茶菜属植物，是一种多年生小草本。具有清热袪湿、凉血散淤之功效，民间用于治疗急性肝炎、急性胆囊炎、跌打淤肿等症［1］。多糖是一类免疫活性物质，具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老等作用［2～5］。目前对溪黄草多糖的研究未见报道。本文建立石油醚去脂80%乙醇去杂热水提取氯仿、正丁醇去蛋白质活性炭去色素乙醇沉淀的提取工艺

5、，从溪黄草中提取多糖，测得溪黄草多糖对葡萄糖的换算因子，用蒽酮硫酸比色法测定并计算出溪黄草多糖含量，根据实验条件研究了其对羟自由基的清除作用和体外抑菌作用，期望为肇庆山区中药材的综合开发利用提供一些参考。　　1器材　　1.1仪器DJ10A倾倒式粉碎机、A2004N和FA2004N电子天平、RE52AA旋转式蒸发器、HH-4型数显恒温水浴锅、低温冰柜、脂肪抽出装置、电热恒温真空干燥箱、752分光光度计、UVProbe2550型紫外可见光光度计、电热手提压力蒸气消毒器、水式热恒温培养箱。　　1.2材料溪黄草

6、购于肇庆中药材市场；大肠杆菌（Escherichiacoil）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、金黄色葡萄球菌（Stapphylocacusaureus）、黑曲霉（Aspergillusniger）、酵母菌(Yeastfungus)均由肇庆学院生物学系微生物室提供。（细菌于牛肉膏蛋白胨培养基上活化（37℃，24h）；霉菌于查氏培养基上活化（28℃，48h）；酵母菌于无菌水中活化（28℃，4h）。　　1.3试剂蒽酮、浓硫酸、硫脲、水杨酸、过氧化氢、硫酸亚铁、无水乙醇、丙醇、石油醚、乙醚、氯仿、正

7、丁醇等为国产分析纯。　　2方法与结果　　2.1溪黄草多糖的提取与精制称取溪黄草粉末60g，置脂肪抽出装置中，加入石油醚（60～90℃）250ml，回流脱脂。滤渣挥干溶剂后，加入80%乙醇回流提取2次（1.5h/次）。将滤渣挥干溶剂后加蒸馏水400ml，回流提取1h。取滤液，滤渣再加蒸馏水300ml提1次，将两次所得滤液合并，减压浓缩至一定体积。加入氯仿正丁醇液（4∶1）轻摇，静置取多次，除去蛋白质。水溶液中加入适量活性碳60℃保温30min，过滤，滤液冷却后加入乙醇，使乙醇浓度达85%，放置4℃冰箱中过夜。抽

8、滤，沉淀依次用95%乙醇、丙醇、乙醚各洗3次，真空干燥至恒重，即得精制溪黄草多糖，密封保存备用。　　2.2样品中溪黄草多糖含量测定　　2.2.1标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品0.2000g，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度；摇匀，制成2.000mg/ml的标准溶液，然后分别移取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml标准溶液。置于10ml容量瓶中