魔芋软腐病菌的分离鉴定及其 GFP 标记.pdf

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1、贵州农业科学2014,42(12):118~121GuizhouAgriculturalSciences[文章编号]1001-3601(2014)12-0750-0118-04魔芋软腐病菌的分离鉴定及其GFP标记黄露1,刘永翔2,3,任秀秀4,丁海兵3,何天久3,刘作易2*(1.贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;2.贵州省农业生物技术重点实验室,贵州贵阳550006;3.贵州省生物技术研究所,贵州贵阳550006;4.贵州工程应用技术学院,贵州毕节550017)[摘要]为了解贵州魔芋软腐病的致病病原,对取自贵州台江县的魔芋软腐病病原菌进行了分离、回接和鉴定。结

2、果表明:在分离到的16个菌株中发现1株病原菌能引起魔芋软腐病,通过16SrDNA序列分析发现该病原菌为菊欧文氏杆菌(Erwiniachrysanthemi);通过化学转化法,成功获得了病原菌绿色荧光蛋白标记的工程菌株。[关键词]魔芋;软腐病;鉴定;GFP标记+[中图分类号]S432.42[文献标识码]Alsolation,ldentificationandGFPMarkerofSoftRotBacteriaStrainsinAmorphophallusrivieri1,LIUYongxiang2,3,RENXiuxiu4,DINGHaibing3,HETianjiu3,

3、LIUZuoyi2*HUANGLu(1.CollegeofLifeSciences,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025;2.GuizhouKeyLaboratoryforAgriculturalBiologicalTechnology,Guiyang,Guizhou550025;3.GuizhouinstituteofBiologicalTechnology,Guiyang,Guizhou550025;4.GuizhouCollegeofEngineeringAppliedTechnology,Bijie,Guizhou550

4、017,China)Abstract:ThepathogenicbacteriastrainsofAmorphophallusrivierisoftrotfromTaijiangCounty,Guzhouwereisolated,inoculatedandidentifiedtostudythepathogenofAmorphophallusrivierisoftrotinGuizhou.TheresultsshowedthatonepathogenicbacteriastraintocauseAmorphophallusrivierisoftrotisisolated

5、from16strains,andthestrainisidentifiedasErwiniachrysanthemiby16SrDNAsequenceanalysis.TheengineeringstrainwithGFPmarkerissuccessfullyobtainedbythechemicalconversionmethod.Keywords:Amorphophallusrivieri;softrot;identification;GFPmarker魔芋(Amorphophallusrivieri)为天南星科的魔芋软腐进行了病原菌的分离鉴定,并对分离到(Ar

6、aceae)魔芋属(AmorphophallusBlume)多年生的致病菌进行GFP标记,以期获得能够表达绿色荧草本植物,又名蒟蒻、蒟芋、蒻头和鬼芋等,全属记载光蛋白的病原菌菌株,为病害的防治提供参考。了163种,在我国云南、湖北、贵州等省有广泛的种1材料与方法植。魔芋在规模种植中主要病害有白绢病和软腐病,其中,魔芋软腐病易大面积爆发,发病严重的地1.1材料[1-4]块几乎绝产,增加了农民的种植风险。相关研究魔芋病块(魔芋品种为花魔芋)采自贵州省台江表明,引起魔芋软腐病的病原菌主要是胡萝卜软腐县魔芋软腐病发病比较严重的田块,4℃保存,备用。欧氏杆菌胡萝卜致病变种(Eri

7、winiacarotovora培养基为NA培养基:蛋白胨10g,牛肉浸膏pv.carotovora)。据初步统计,到2012年,贵州魔3g,氯化钠5g,琼脂粉15g,水1000mL,pH7.2。芋连片种植面积已达1.97万hm2,且种植面积逐年1.2质粒及引物[5]增加。贵州省台江县近几年发展魔芋种植,2013含有绿色荧光蛋白基因的质粒pHT315-gfp由年种植面积为268.5hm2,并计划扩大魔芋种植基华中农业大学农业微生物重点实验室提供。地及在周边其他县市发展外协基地,形成魔芋产业引物由primer5.0设计,上海捷瑞生物公司合链。

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