魔芋软腐病菌的分离鉴定及其 GFP 标记.pdf

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1、贵州农业科学２０１４，４２（１２）：１１８～１２１ＧｕｉｚｈｏｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ［文章编号］１００１-３６０１（２０１４）１２-０７５０-０１１８-０４魔芋软腐病菌的分离鉴定及其ＧＦＰ标记黄露１，刘永翔２，３，任秀秀４，丁海兵３，何天久３，刘作易２*（１．贵州大学生命科学学院，贵州贵阳５５００２５；２．贵州省农业生物技术重点实验室，贵州贵阳５５０００６；３．贵州省生物技术研究所，贵州贵阳５５０００６；４．贵州工程应用技术学院，贵州毕节５５００１７）［摘要］为了解贵州魔芋软腐病的致病病原，对取自贵州台江县的魔芋软腐病病原菌进行了分离、回接和鉴定。结

2、果表明：在分离到的１６个菌株中发现１株病原菌能引起魔芋软腐病，通过１６ＳｒＤＮＡ序列分析发现该病原菌为菊欧文氏杆菌（Ｅｒｗｉｎｉａｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）；通过化学转化法，成功获得了病原菌绿色荧光蛋白标记的工程菌株。［关键词］魔芋；软腐病；鉴定；ＧＦＰ标记＋［中图分类号］Ｓ４３２．４２［文献标识码］Ａｌｓｏｌａｔｉｏｎ，ｌｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＧＦＰＭａｒｋｅｒｏｆＳｏｆｔＲｏｔＢａｃｔｅｒｉａＳｔｒａｉｎｓｉｎＡｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓｒｉｖｉｅｒｉ１，ＬＩＵＹｏｎｇｘｉａｎｇ２，３，ＲＥＮＸｉｕｘｉｕ４，ＤＩＮＧＨａｉｂｉｎｇ３，ＨＥＴｉａｎｊｉｕ３，

3、ＬＩＵＺｕｏｙｉ２*ＨＵＡＮＧＬｕ（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＧｕｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５００２５；２．ＧｕｉｚｈｏｕＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５００２５；３．ＧｕｉｚｈｏｕｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５００２５；４．ＧｕｉｚｈｏｕＣｏｌｌｅｇｅｏｆＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＡｐｐｌｉｅｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｉｊｉｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５０

4、０１７，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎｓｏｆＡｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓｒｉｖｉｅｒｉｓｏｆｔｒｏｔｆｒｏｍＴａｉｊｉａｎｇＣｏｕｎｔｙ，Ｇｕｚｈｏｕｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ，ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｏｆＡｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓｒｉｖｉｅｒｉｓｏｆｔｒｏｔｉｎＧｕｉｚｈｏｕ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｏｎｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎｔｏｃａｕｓｅＡｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓｒｉｖｉｅｒｉｓｏｆｔｒｏｔｉｓｉｓｏｌａｔｅｄ

5、ｆｒｏｍ１６ｓｔｒａｉｎｓ，ａｎｄｔｈｅｓｔｒａｉｎｉｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓＥｒｗｉｎｉａｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉｂｙ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ．ＴｈｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｓｔｒａｉｎｗｉｔｈＧＦＰｍａｒｋｅｒｉｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓｒｉｖｉｅｒｉ；ｓｏｆｔｒｏｔ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＧＦＰｍａｒｋｅｒ魔芋（Ａｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓｒｉｖｉｅｒｉ）为天南星科的魔芋软腐进行了病原菌的分离鉴定，并对分离到（Ａｒ

6、ａｃｅａｅ）魔芋属（ＡｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓＢｌｕｍｅ）多年生的致病菌进行ＧＦＰ标记，以期获得能够表达绿色荧草本植物，又名蒟蒻、蒟芋、蒻头和鬼芋等，全属记载光蛋白的病原菌菌株，为病害的防治提供参考。了１６３种，在我国云南、湖北、贵州等省有广泛的种１材料与方法植。魔芋在规模种植中主要病害有白绢病和软腐病，其中，魔芋软腐病易大面积爆发，发病严重的地１．１材料［１-４］块几乎绝产，增加了农民的种植风险。相关研究魔芋病块（魔芋品种为花魔芋）采自贵州省台江表明，引起魔芋软腐病的病原菌主要是胡萝卜软腐县魔芋软腐病发病比较严重的田块，４℃保存，备用。欧氏杆菌胡萝卜致病变种（Ｅｒｉ

7、ｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａ培养基为ＮＡ培养基：蛋白胨１０ｇ，牛肉浸膏ｐｖ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）。据初步统计，到２０１２年，贵州魔３ｇ，氯化钠５ｇ，琼脂粉１５ｇ，水１０００ｍＬ，ｐＨ７．２。芋连片种植面积已达１．９７万ｈｍ２，且种植面积逐年１．２质粒及引物［５］增加。贵州省台江县近几年发展魔芋种植，２０１３含有绿色荧光蛋白基因的质粒ｐＨＴ３１５-ｇｆｐ由年种植面积为２６８．５ｈｍ２，并计划扩大魔芋种植基华中农业大学农业微生物重点实验室提供。地及在周边其他县市发展外协基地，形成魔芋产业引物由ｐｒｉｍｅｒ５．０设计，上海捷瑞生物公司合链。