空心莲子草致病菌分离、鉴定及其致病效果研究-论文.pdf

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1、第32卷第5期佛山科学技术学院学报（自然科学版）Vol.32No.52014年9月JournalofFoshanUniversity（NaturalSciencesEdition）Sep.2014文章编号：1008-0171（2014）05-0011-03空心莲子草致病菌分离、鉴定及其致病效果研究何丽烂，陈乐辉，王芳（佛山科学技术学院园艺系，广东佛山528000）摘要：从自然发病的空心莲子草中分离出9种菌株，经鉴定菌株B、D分别为不同的链格孢菌，菌株C为粉孢菌，菌株F为尖孢镰刀菌，菌株G为串珠镰刀菌，菌株E、I

2、为未知真菌，A、H均为细菌。将分离得到的菌株接种到健康的空心莲子草上，结果表明，在供试的9个菌株中，菌株F（尖孢镰刀菌）对空心莲子草有较强的抑制作用，其次为菌株B（链格孢菌），接种9d后的病情指数分别为46.69%和17.33%。关键词：空心莲子草；致病菌；鉴定中图分类号：S459文献标志码：A空心莲子草（AlternantheraphiloxeroidesGriseb），又名喜旱莲子草，是苋科（Amaranthaceae）莲子草属多年生宿根草本植物。它原产于巴西，现已遍及美洲、澳洲、亚洲及非洲的许多国家和地区。空心莲子草生［1］命力极强，生长繁

3、殖迅速，是我国许多地区的恶性杂草之一。在我国，防除空心莲子草的主要措施是化学防除，使用效果较好除草剂有草甘膦、使它隆及复配剂水花生净。由于大量施用除草剂不可避免会造成环［2-3］境污染，因此，利用微生物防除空心莲子草的研究开始被重视起来。比如向梅梅等（1999）分离出了对空［4］心莲子草有抑制作用的莲子草假隔链格孢菌（Nimbyaalternantherae），并对其生长和产孢条件进行了探索；［5］万佐玺等发现链格孢菌（Altermariaalternata（Fr）Keissler）的毒素对空心莲子草有很强的致病作用。本研究对自然发病的空心莲子草病

4、原菌进行了分离，目的是筛选出高致病性的菌株，为开发空心莲子草新型除草剂提供实验依据。1材料与方法1.1试验材料空心莲子草，采自佛山科学技术学院园艺基地。1.2试验设计1.2.1菌株的分离与鉴定2将采集到的材料用自来水冲洗干净并在蒸馏水中浸泡2～3h后取出。在空心莲子草叶片剪5mm的小块组织，用75%酒精浸泡30s、无菌水换洗4次后，移入马铃薯琼脂（PDA）平板上培养。28℃培养3d后，挑取小块组织边缘未污染的菌丝，再次移入PDA平板上培养。无污染的菌株移入PDA斜面培养，编号备用。在培养得到的微生物菌落中挑选单菌落再分离培养，镜检，根据菌

5、体形态特征进行鉴定。1.2.2致病菌株的筛选将分离获得的菌株分别接种PDA平板上培养7d后，用无菌水冲下，稀释至100mL，用喷雾器喷洒到健康的空心莲子草植株上，设3个重复，每个重复20株，3天喷一次，连喷3次。接种材料于室温收稿日期：2014-01-10作者简介：何丽烂（1973-），女，广东河源人，佛山科学技术学院高级实验师。12佛山科学技术学院学报（自然科学版）第32卷（25℃）下保湿24h，取出后观察记录发病情况，每天记录存活的叶片总数、病叶数、各叶片的发病级数，［6］计算各菌株的病情指数。（各级病叶数×各级代表值）×100病情指数

6、（%）=移（调查总叶数×最高一级代表值）叶片病情分级标准：0级为叶片上无病斑；1级为叶片上1～4个病斑，不黄化；2级为叶面病斑覆盖率小于20%，不黄化；3级为叶面病斑覆盖率小于40%，不黄化；4级为叶面病斑覆盖率小于60%，病斑密集，局部黄化；5级为叶面病斑覆盖率大于80%，病斑密布或聚积成大面积坏死斑，叶片80%以上黄化；6级为叶片呈火烧状卷曲枯死或脱落。2结果与分析2.1空心莲子草微生物菌株的分离与鉴定利用组织分离法，从空心莲子草叶片中分离得到9种不同形态和颜色的微生物，分别编号为A、B、C、D、E、F、G、H、I。菌株A菌落呈乳白色，边缘散射

7、突起；菌株B菌落呈褐色轮纹状，边缘灰色；菌株C菌落呈白色棉毛状；菌株D菌落呈黑褐色散射状，边缘灰色；菌株E菌落中间呈奶黄色，边缘呈白色轮纹毛状；菌株F菌落呈白色絮状；菌株G菌落呈苍白色毛毡状；菌株H菌落中间呈奶红色平滑状，边缘突起；菌株I菌落呈褐色粉粒状。观察发现真菌B分生孢子梗淡褐色，单枝弯曲，分生孢子褐色，呈卵圆形、倒棍棒形，有纵横隔，顶端具喙状细胞，应属半知菌亚门中的链格孢属（见图2）；真菌C菌丝体白色，分生孢子梗直立不分枝，分生孢子无色串生，属半知菌亚门中的粉孢属（见图3）；真菌D菌落呈黑褐色散射状，边缘灰色，分生孢子单生，褐色，卵圆形，有

8、纵横隔，为半知菌亚门的链格孢属（见图4）；真菌E菌落中间橙色，边缘呈白色轮纹毛状，显微镜下只观察到其菌丝，故无法鉴定其种属