实验-肠道致病菌的分离鉴定.ppt

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1、实验四肠道致病菌分离鉴定病原生物学教研室Content示教：主要肠道杆菌，大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌的形态、染色性主要肠道杆菌的培养特性：SS平板/EMB平板主要肠道杆菌的生化反应：双糖、尿素分解反应操作：肥达反应粪便肠道致病菌的分离和鉴定——血清学(*续)录像：厌氧菌肠道杆菌的分类肠杆菌科志贺菌属埃希菌属沙门菌属克雷伯菌属变形杆菌属ETEC,EIEC,EPEC,EHEC,EAEC痢疾、福氏、鲍氏、宋内伤寒，副伤寒，猪霍乱，肠炎肠道杆菌的基本特征形态结构相似培养要求不高生化反应活跃抗原结构复杂抵抗力不强易发生变异粪便标本肠道致病菌鉴

2、别流程标本鉴别培养基（SS培养基）生化反应（双糖管）血清学鉴定SS平板挑取可疑菌落2个(无色,透明,小菌落)接种双糖管培养,观察SS平板——分离肠道病原菌的强选择培养基成分：基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄）作用：乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠道致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。病原菌:小,无色,透明非致病菌:大,红色E

3、MB平板病原菌:透明,无色非致病菌:紫黑色双糖管发酵乳糖H2S试验发酵葡萄糖(产酸产气)及动力上层：乳糖,Fe2+固体下层：葡萄糖半固体指示剂:酚红（pH6.8-8.4,黄红）致病菌红色非致病菌黄色▼观察：乳糖葡萄糖动力硫化氢尿素酶大肠埃希菌＋+－痢疾志贺菌－+－－伤寒沙门菌－+++/－副伤寒杆菌－++－变形杆菌－+++红色黄色双糖管结果观察黄色黄色可疑肠道致病菌大肠埃希菌双糖管接种方法穿刺—斜面接种法肥达试验原理：伤寒沙门菌菌体O抗原伤寒沙门菌鞭毛Ｈ抗原甲型副伤寒沙门菌鞭毛H抗原肖氏沙门菌鞭毛Ｈ抗原已知抗原病人血清中的未知抗体凝集肥达试验操作

4、：病人血清生理盐水微量板12345678伤寒O0.2ml0.2ml伤寒H0.2ml0.2ml副甲H0.2ml0.2ml肖氏H0.2ml0.2ml1:201:401:801:1601:3201:6401:1280生理盐水混匀Ag加样方向抗原肥达试验结果分析（1）凝集程度：（＋＋＋＋）上层液澄清，细菌全部凝集于孔底（＋＋＋）上层液基本透明，细菌大部分（75％）凝集于孔底（＋＋）上层液半透明，细菌在孔底有明显凝集（＋）上层液混浊，孔底有少量凝集（－）不凝集，同于对照书写报告：＋＋反应的最高稀释度为凝集效价肥达试验结果分析（2）凝集效价：伤寒沙门菌O≥

5、1：80，H≥1：160副伤寒沙门菌H≥1：80动态观察：双份血清，效价≥4倍O与H抗体的诊断意义：O—IgM,H—IgGO、H抗体均高：肠热症O、H抗体均低：未患病O抗体不高，H抗体高：回忆反应，预防接种O抗体高，H抗体不高：感染早期，交叉反应上次实验结果观察：脓汁标本中的两种菌落：黄色，完全溶血白色，不溶血接种甘露醇发酵管革兰染色观察是否发酵甘露醇TheEndThanks