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时间:2020-04-27
《siRNA介导RRM2沉默对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响研究-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华肿瘤防治杂志2014年2月第21卷第4期CHINJCANCERPREVTREAT,February2014,Vo1.21No.4《实验研究/论著lsiRNA介导RRM2沉默对卵巢癌细胞JII~*tt敏感性影响研究张梦王蕾焦金文张文华王黎明王菲瑚匕如永1.青岛大学医学院附属医院(妇科:张梦,王蕾,焦金文,王黎明,王菲;中心实验室:姚如永),山东青岛2660032.青岛市中心医院妇科,山东青岛266042【摘要】目的:探讨小干扰RNA(siRNA)介导的核糖核苷酸小亚基M2(ronucleotidereductaseM2,RRM2)沉默对顺铂(DDP)诱导的卵巢癌耐药细胞株SKOV
2、3/DDP敏感性的影响。方法:采用间歇浓度梯度递增法诱导SKOV3/DDP;将RRM2基因的特异性siRNA转染SKOV3/DDP细胞,另设空白组和SKOV3/DDP-RRM2一neg(阴性组)做为对照;荧光PCR技术和蛋白质印迹法分别检测转染后各组细胞中RRM2基因mRNA和蛋白表达;MTT法检测RNAi对SK一0V3/DDP细胞药物敏感性的影响。结果:成功诱导出卵巢癌DDP耐药细胞株SKOV3/DDP细胞,其耐药系数达到3.6,属低度耐药,但对吉西他滨(Gem)仍敏感。DDP对干扰组、阴性组和空白组细胞48h的ICs。分别为(3.Og±0.11)、(9.88±0.37)和(1O
3、.35±0.03)/tg/mL,3者间差异有统计学意义,P<0.001。干扰组细胞对DDP的敏感度提高了约3倍,其RF为3.3。SK0V3/DDP—RRM2一RNAi667(I)组RRM2mRNA水平下调为74.1,P一0.010;SKOV3/DDP—RRM2一RNAi480(1I)组RRM2rnRNA水平下调为55.9,P一0.016;SKOV3/DDP-RRM2一RNAil179(11I)组RRM2mRNA水平下调为43.1,P一0.001。其中,以转染I组基因沉默率(82.33)最高,P<0.001;阴性组(0.0086)与空白组(0.0082)比较,差异无统计学意义,P一0
4、.133。转染RRM2的不同靶序列72h后RRM2蛋白的表达量最低,I组为0.062±0.006,lI组为0.314±0.002,I]I组为0.123±0.002,与阴性组(0.715±0.034)和空白组(0.516±0.040)比较均明显降低,但以转染I组细胞的蛋白相对表达量下降最明显,F一658.6,P一0.0033。Gem和DDP联合作用72h时,转染组细胞凋亡率为(96±3.0),与其各组比较,差异均有统计学意义,P值均<0.001。结论:通过RNAi技术可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的转录和翻译水平,增加DDP耐药细胞的药物敏感性,并促进DDP诱导的卵巢癌耐药细胞凋亡
5、,在一定程度上逆转DDP耐药性;RNAi技术联合Gem及DDP作用可有效提高卵巢癌DDP耐药细胞的凋亡率,有望成为铂类耐药的卵巢癌晚期患者一线治疗方案。【关键词】卵巢肿瘤;基因沉默;RNA干扰;耐药逆转;核糖核苷酸小亚基M2中华肿瘤防治杂志,2014,21(4):273—279InfluenceofsmallinterferenceRNA-mediatedRRM2silenceontheDDPsensitivityofovariancancercellZHANGMeng,WANGLei,JIAOJin—wen,ZHANGWen—hua,WANGLi—ruing,WANGFei,YA
6、ORu—yong1.AffiliatedHospitalofMedicalCollegeofQingdaoUniversity,Qingdao266003,P.R.China2.DepartmentofObstetricsandGynecology,QingdaoCentralHospital,Qingdao266042,P.R.China[-ABSTRACT]OBJECTIVE:Toinvestigatetheeffectofsmal1interferenceRNA(siRNA)一mediatedtheM2subunitofribonucleotidereductase(RRM2
7、)silencingonthedrugsensitivityofcisplatin-resistantSKOV3/cisplatin(DDP)(ovariancarcinoma)cells.METHoDS:Cisplatin-resistantovariancarcinomacel1strainSKOV3/DDPwasinducedintermittentlywithincreasingdrugdosage.siRNAtransfectionwasmediatedby
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