siRNA介导RRM2沉默对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响研究-论文.pdf

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1、中华肿瘤防治杂志2014年2月第21卷第4期CHINJCANCERPREVTREAT，February2014，Vo1．21No．4《实验研究／论著lsiRNA介导RRM2沉默对卵巢癌细胞JII~*tt敏感性影响研究张梦王蕾焦金文张文华王黎明王菲瑚匕如永1．青岛大学医学院附属医院(妇科：张梦，王蕾，焦金文，王黎明，王菲；中心实验室：姚如永)，山东青岛2660032．青岛市中心医院妇科，山东青岛266042【摘要】目的：探讨小干扰RNA(siRNA)介导的核糖核苷酸小亚基M2(ronucleotidereductaseM2，RRM2)沉默对顺铂(DDP)诱导的卵巢癌耐药细胞株SKOV

2、3／DDP敏感性的影响。方法：采用间歇浓度梯度递增法诱导SKOV3／DDP；将RRM2基因的特异性siRNA转染SKOV3／DDP细胞，另设空白组和SKOV3／DDP-RRM2一neg(阴性组)做为对照；荧光PCR技术和蛋白质印迹法分别检测转染后各组细胞中RRM2基因mRNA和蛋白表达；MTT法检测RNAi对SK一0V3／DDP细胞药物敏感性的影响。结果：成功诱导出卵巢癌DDP耐药细胞株SKOV3／DDP细胞，其耐药系数达到3．6，属低度耐药，但对吉西他滨(Gem)仍敏感。DDP对干扰组、阴性组和空白组细胞48h的ICs。分别为(3．Og±0．11)、(9．88±0．37)和(1O

3、．35±0．03)／tg／mL，3者间差异有统计学意义，P<0．001。干扰组细胞对DDP的敏感度提高了约3倍，其RF为3．3。SK0V3／DDP—RRM2一RNAi667(I)组RRM2mRNA水平下调为74．1，P一0．010；SKOV3／DDP—RRM2一RNAi480(1I)组RRM2rnRNA水平下调为55．9，P一0．016；SKOV3／DDP-RRM2一RNAil179(11I)组RRM2mRNA水平下调为43．1，P一0．001。其中，以转染I组基因沉默率(82．33)最高，P<0．001；阴性组(0．0086)与空白组(0．0082)比较，差异无统计学意义，P一0

4、．133。转染RRM2的不同靶序列72h后RRM2蛋白的表达量最低，I组为0．062±0．006，lI组为0．314±0．002，I]I组为0．123±0．002，与阴性组(0．715±0．034)和空白组(0．516±0．040)比较均明显降低，但以转染I组细胞的蛋白相对表达量下降最明显，F一658．6，P一0．0033。Gem和DDP联合作用72h时，转染组细胞凋亡率为(96±3．0)，与其各组比较，差异均有统计学意义，P值均<0．001。结论：通过RNAi技术可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的转录和翻译水平，增加DDP耐药细胞的药物敏感性，并促进DDP诱导的卵巢癌耐药细胞凋亡

5、，在一定程度上逆转DDP耐药性；RNAi技术联合Gem及DDP作用可有效提高卵巢癌DDP耐药细胞的凋亡率，有望成为铂类耐药的卵巢癌晚期患者一线治疗方案。【关键词】卵巢肿瘤；基因沉默；RNA干扰；耐药逆转；核糖核苷酸小亚基M2中华肿瘤防治杂志，2014，21(4)：273—279InfluenceofsmallinterferenceRNA-mediatedRRM2silenceontheDDPsensitivityofovariancancercellZHANGMeng，WANGLei，JIAOJin—wen，ZHANGWen—hua，WANGLi—ruing，WANGFei，YA

6、ORu—yong1．AffiliatedHospitalofMedicalCollegeofQingdaoUniversity，Qingdao266003，P．R．China2．DepartmentofObstetricsandGynecology，QingdaoCentralHospital，Qingdao266042，P．R．China[-ABSTRACT]OBJECTIVE：Toinvestigatetheeffectofsmal1interferenceRNA(siRNA)一mediatedtheM2subunitofribonucleotidereductase(RRM2

7、)silencingonthedrugsensitivityofcisplatin-resistantSKOV3／cisplatin(DDP)(ovariancarcinoma)cells．METHoDS：Cisplatin-resistantovariancarcinomacel1strainSKOV3／DDPwasinducedintermittentlywithincreasingdrugdosage．siRNAtransfectionwasmediatedby