sirna介导的rrm2沉默对卵巢癌细胞药物敏感性的影响

《sirna介导的rrm2沉默对卵巢癌细胞药物敏感性的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、siRNA介导的RRM2沉默对卵巢癌细胞药物敏感性的影响中文摘要目的探讨小于扰RNA(siRNA)介导的核糖核苷酸小亚基M2(RRM2)沉默对顺铂(cDDP)诱导的卵巢癌耐药细胞株SKOV3／cDDP药物敏感性的影响。方法采用间歇浓度梯度递增法诱导卵巢癌耐药细胞株SKOV3／cDDP，至耐药系数达到3以上方可进行实验；用脂质体法分别将RRM2基因的特异性siRNA及非特异性siRNA转染SKOV3／cDDP细胞，另设未转染组及转染空脂质体组做为对照：采用实时定量荧光PCR技术和蛋白印迹法，分别检测各处理组细胞中

2、RRM2基因的mRNA和蛋白的表达情况；用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测RNAi对SKOV3／cDDP细胞药物敏感性的影响；于转染后24h分剐加入浓度为1099／ml的吉西他滨(Gemcitabine，Gem)和cDDP，用流式细胞仪检测不同时间点各组细胞周期及凋亡情况。结果(1)成功诱导出卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／cDDP细胞，其耐药系数达到3，6，属低度耐药，但对Gem仍敏感；(2)SKOV3／cDDP细胞中RRM2基因的表达水平明显高于SKOV3细胞(P=0．000)；转染后24h、48h、72

3、h、96h，SKOV3／cDDP细胞RRM2mRNA和蛋白的表达水平均有下调，其中分别以转染后48h及72h下调水平最为明显，分别下调了约74％并tl92．4％，明显低于阴性对照组及空白对照组(P<0．05)。(3)11顷铂对干扰组细胞的48h半数抑制浓度(1(250)值明显低于阴性对照组和空白对照组(P=0．032)。(4)于转染后24h联合半数致死量的Gem及cDDP作用24h、48h、72h、96h后，卵巢癌细胞出现不同程度的凋亡，并且细胞周期出现G1／S期阻滞，其中以作用72h的凋亡率最高(96土3．0

4、)％，与干扰组、干扰组分别联合吉西他滨、顺铂作用组，在不同时间点的细胞凋亡率差异均有统计学意义(P<0．05)。结论通过RNAi技术可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的转录和翻译水平，增加顺铂耐药细胞的药物敏感性，并促进顺铂诱导的卵巢癌耐药细胞凋亡，在一定程度上逆转顺铂耐药性；RNAi技术联合吉西他滨及顺铂作用可有效提高卵巢癌顺铂耐药细胞的凋亡率，有望成为铂类耐药的卵巢癌晚期难治性患者～线治疗方案。硕士研究生张梦(妇产科学)指导教师王黎明副教授关键词：卵巢肿瘤；基因沉默；RNA干扰；耐药逆转；RRM2青岛大学硕上

5、学位论文=i翩R刚Ⅵ2sileii醅～!■TheinfluenceofSmallinterferenceRNA．mediatedonthedrugsensitivityofovariancancercellABSTRACTObjective：ToinvestigatetheeffectsofsmallinterferenceRNA(siRNA)一mediatedsilencingoftheribonucleotidereductaseM2subunitfRRM21ontheapoptosisandthedrug

6、sensitivityofcisplatin．resistantSKOV3／13DPcells．Methods：Cisplatin—resistantovariancarcinomacellstrainSKOV3／cDDPwasinducedintermittentlywithincreasingdrugdosage．siRNAtransfectionwasmediatedbylipofectamine2000tosilenceRRM2gene．Un—transfectedcellservedasnegativ

7、econtrols．mRNAandproteinexpression1cvelsofRRM2wereevaluatedbyreal．timePCRandwesternblotaftertransfection．ThecellgrowthinhibitionratewasevaluatedbyMTT．Thecellularapoptoticandcyclingwasidentifiedbyflowc班ometry(FCM)．Results：(1)stablecisplatin—resistantSKOV3／cDD

8、PcellstrainwasestablishedbyculturingwithcDDPfor9monthsandtheresistanceindexesofSKOV3／CDDPrWas3．6．(2)Theexpression1evelofRRM2geneinSKOV3／DDPcellswashigherthanthatintheSKOV3cellsfP=0．000)．Boththem