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《siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78可增强乳腺癌细胞对顺铂的敏感性-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·44·doii0.3969/j.issn.1673—4254.2013.O1.i0JSouthMedUniv,2013,33(1):44—47基础研究siRNA沉默葡萄糖调节蛋g:t78可增强乳腺癌细胞对JI白的敏感性浦龙健,黄莹莹,李阳,徐锦程,蒋琛琛,刘浩,蒋志文蚌埠医学院药学系//安徽省生化药物工程技术研究中心,安徽蚌埠233030摘要:目的探讨siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78(GRP78)~强顺铂对乳腺癌细胞凋亡的敏感性,以期为乳腺癌的临床治疗提供新的靶点。方法MTT法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16i
2、xmol/L)Jl~铂对乳腺癌细胞MDA—MB·231的增殖抑制作用;PI/Annexinv双染检测顺铂(8岬ol/L)对siRNA转染沉默GRP78~L腺癌细胞MDA—MB.231凋亡的影响,同时将未转染和转染空质粒乳腺癌细胞MDA.MB.23l作为空白和阴性对照;Westernblot检测顺铂(8pmol/L)处N-%腺癌细胞MDA—MB-231不同时间(0、6、l6、24h)GRP78的表达以及siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA.MB.231中GRP78的表达。结果8mo1/L顺铂作用于乳腺癌细胞MDA
3、.MB.23124、48、72h细胞存活率分别为83.13%、54.22%、35.79%,但24h细胞凋亡率仅为i0.8%。将GRP78沉默后,细胞的凋亡率为24.6%,沉默GRP78并合用顺铂进行刺激,细胞的凋亡率为48.9%,明显高于单用顺铂组。用顺铂刺激乳腺癌细胞MDA.MB一231GRP78表达先上调后有减弱趋势,而siRNA转染沉默GRP78后,GRP78表达明显下降。结论抑制GRP78的表达可以增加乳腺癌细胞的凋亡率,为乳腺癌的临床治疗提供了新的靶点。关键词:乳腺癌;葡萄糖调节蛋白78;小干扰RNA;顺铂;
4、凋亡SmallinterferingRNA—mediatedglucose·-regulatedprotein78knockdownenhanceschemosensitivityofbreastcancercellstocisplatinPULongjian,HUANGYingying,LIYang,XUlincheng,J~ANGChenchen,LIUHao,JIANGZhiwenFacultyofPharmac~BengbuMedicalCollege,Bengbu233030,ChinaAbstract:Ob
5、jectiveToinvestigatetheeffectofsmal1interferingRNA—mediatedglucose—regulatedprotein78(GRP78)knockdownonthechemosensitivityofbreastcancercellstocisplatin.MethodsHumanbreastcancercelllineMDAMB一231wasexposedtodifferentdosesofcisplatin01248and16pmol/L)andthechangesi
6、ncellviabilityweredetectedusingMTTassay.PI/AnnexinVstainingwasusedtoobservetheapoptosisofthecellsinresponsetotransfectionwithasmal1interferingRNAtargetingGRP78rpSHISi—GRP78).WesternblottingwasemployedtodetectGRP78expressioninpSHISi—GRP78一transfectedcellsafterexp
7、osureto8pmol/Lcisplatinfor24,48and72h.ResultsExposureofthecellsto8umol/Lcisplatinfor24,48and72hresultedinacellsurvivalrateof83.13%,54.22%and35.79%,respectivel1I‘butthecellapoptosisratewasonly10.8%at24h.TransfectionofMDA—MB一231cellswithpSHISi—GRP78causedacellapop
8、tosisrateof24.6%,whichincreasedto489%incellswithbothpSH1Si-GRP78transfecmandcisplatinexposure.Cisplatinexposurecausedaninitia1up—regulationfollowedthenbyadown—regulat
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