siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78可增强乳腺癌细胞对顺铂的敏感性-论文.pdf

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1、·44·doii0．3969／j．issn．1673—4254．2013．O1．i0JSouthMedUniv,2013，33(1)：44—47基础研究siRNA沉默葡萄糖调节蛋g：t78可增强乳腺癌细胞对JI白的敏感性浦龙健，黄莹莹，李阳，徐锦程，蒋琛琛，刘浩，蒋志文蚌埠医学院药学系／／安徽省生化药物工程技术研究中心，安徽蚌埠233030摘要：目的探讨siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78(GRP78)~强顺铂对乳腺癌细胞凋亡的敏感性，以期为乳腺癌的临床治疗提供新的靶点。方法MTT法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16i

2、xmol／L)Jl~铂对乳腺癌细胞MDA—MB·231的增殖抑制作用；PI／Annexinv双染检测顺铂(8岬ol／L)对siRNA转染沉默GRP78~L腺癌细胞MDA—MB．231凋亡的影响，同时将未转染和转染空质粒乳腺癌细胞MDA．MB．23l作为空白和阴性对照；Westernblot检测顺铂(8pmol／L)处N-％腺癌细胞MDA—MB-231不同时间(0、6、l6、24h)GRP78的表达以及siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA．MB．231中GRP78的表达。结果8mo1／L顺铂作用于乳腺癌细胞MDA

3、．MB．23124、48、72h细胞存活率分别为83．13％、54．22％、35．79％，但24h细胞凋亡率仅为i0．8％。将GRP78沉默后，细胞的凋亡率为24．6％，沉默GRP78并合用顺铂进行刺激，细胞的凋亡率为48．9％，明显高于单用顺铂组。用顺铂刺激乳腺癌细胞MDA．MB一231GRP78表达先上调后有减弱趋势，而siRNA转染沉默GRP78后，GRP78表达明显下降。结论抑制GRP78的表达可以增加乳腺癌细胞的凋亡率，为乳腺癌的临床治疗提供了新的靶点。关键词：乳腺癌；葡萄糖调节蛋白78；小干扰RNA；顺铂；

4、凋亡SmallinterferingRNA—mediatedglucose·-regulatedprotein78knockdownenhanceschemosensitivityofbreastcancercellstocisplatinPULongjian，HUANGYingying,LIYang,XUlincheng,J~ANGChenchen,LIUHao,JIANGZhiwenFacultyofPharmac~BengbuMedicalCollege,Bengbu233030，ChinaAbstract：Ob

5、jectiveToinvestigatetheeffectofsmal1interferingRNA—mediatedglucose—regulatedprotein78(GRP78)knockdownonthechemosensitivityofbreastcancercellstocisplatin．MethodsHumanbreastcancercelllineMDAMB一231wasexposedtodifferentdosesofcisplatin01248and16pmol／L)andthechangesi

6、ncellviabilityweredetectedusingMTTassay．PI／AnnexinVstainingwasusedtoobservetheapoptosisofthecellsinresponsetotransfectionwithasmal1interferingRNAtargetingGRP78rpSHISi—GRP78)．WesternblottingwasemployedtodetectGRP78expressioninpSHISi—GRP78一transfectedcellsafterexp

7、osureto8pmol／Lcisplatinfor24，48and72h．ResultsExposureofthecellsto8umol／Lcisplatinfor24,48and72hresultedinacellsurvivalrateof83．13％，54．22％and35．79％，respectivel1I‘butthecellapoptosisratewasonly10．8％at24h．TransfectionofMDA—MB一231cellswithpSHISi—GRP78causedacellapop

8、tosisrateof24．6％，whichincreasedto489％incellswithbothpSH1Si-GRP78transfecmandcisplatinexposure．Cisplatinexposurecausedaninitia1up—regulationfollowedthenbyadown—regulat