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1、应用siRNA技术下调survivin基因表达以增强SGC7901胃癌细胞对顺铂的敏感性【摘要】目的利用小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调survivin基因的表达，检测SGC7901胃癌细胞转染前后对顺铂敏感性的变化。方法实验分为空白对照组(control组)、单用顺铂组(CDDP组)、脂质体组(Lip组)、单用survivinsiRNA组(siRNA组)、转染survivinsiRNA(转染组)及转染survivinsiRNA联合顺铂作用组(联合作用组)。人工合成survivinsiRNA，通过Lip包裹将siRNA转染胃癌细胞S
2、GC7901，荧光显微镜下观察转染情况。MTT法检测各组细胞的增殖抑制率，Westernblot及免疫细胞化学法检测survivin蛋白的表达，Hoechst染色观察细胞凋亡的形态改变。结果Hoechst染色荧光显微镜下control组、Lip组及siRNA组细胞核呈正常的蓝色,而CDDP组、转染组及联合作用组细胞核染色增强、核质浓缩、核碎裂,呈凋亡改变;联合作用组细胞增殖抑制率(±)%明显高于其余各组(P【关键词】survivin;siRNA;胃癌;顺铂Abstract:ObjectiveTodetectthevariationsinci
3、splatinsensitivityofhumangastriccarcinomacelllineSGC7901beforeandaftertransfectiontospecificallydownregulatetheexpressionofsurvivinggenewithsmallinterferingRNA(siRNA)Thisexperimentisdividedintothecontrolgroup,cisplatingroup(CDDPgroup),lipsomegroup(lipgroup),siRNAgroup,tran
4、sfectiongroupandsiRNAcombinedCDDPgroup(combinedgroup).SurvivinsiRNAwasartificiallysynthesizedandthentransfectedintogastriccancercellswithliposome.Thetransfectioneffectsweredeterminedbyfluorescencemicroscopy.TheinhibitoryrateofcellproliferationwasassayedbyMTT,andtheexpressi
5、onofsurvivinprotEinwasdeterminedbyWesternblotandimmunocytochemicalstaining.ThemorphologicalchangesoftheapoptoticcellswereobservedbyHoechstAsobservedunderthefluorescencemicroscopeafterHoechststaining,thenuclEIpresentedasnormalblueinthecontrolgroup,lipgroupandsiRNAgroup,whil
6、eCDDPgroup,siRNAtransfectiongroupandsiRNAcombinedcisplatingrouphadsuchchangesasreinforcednuclearstaining,karyopyknosisandkaryorrhexiswithapoptoticchanges.TheinhibitionrateofcellproliferationinsiRNAcombinedcisplatingroup(±)%wasmarkedlyhigherthantheothergroups(PKeywords：surv
7、ivin;siRNA;gastriccarcinoma;cisplatin顺铂是目前临床上最常用的化疗药物之一,其抗肿瘤作用明显、价格低廉，并且可应用于多种肿瘤的化疗,但是长期应用后极易出现耐受现象，降低其疗效,并且随着剂量的增加，出现的副作用越来越多。有研究表明,长期应用顺铂后，某些肿瘤细胞中出现耐药现象并且可检测到存活素(survivin)的高表达[1]。survivin是近年新发现的一种凋亡抑制因子，具有强大的抗凋亡功能，属于凋亡抑制因子(inhibitorofapoptosisproteins，IAP)家族成员之一。survivin
8、与胃癌的定量研究表明，其表达量与患者的预后呈负相关。分化程度越低的胃癌组织中survivin表达率越高，患者预后越差[2]。因此，本实验通过将人工合成的survivin小干扰RN
