sirna干扰survivin基因联合顺铂对sgc7901细胞生长影响的实验研究

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2、文siRNA干扰survivin基因联合顺铂对SGC7901细胞生长影响的实验研究中文摘要存活素(survivin)是由耶鲁大学的Altieri等在1997年发现的一种凋亡抑制因子(inhibitorofapoptosisproteins，IAl's)，具有强大的抗凋亡功能，属于凋亡抑制因子家族成员之一。人类的survivin蛋白是一类胞质蛋白，在大多数正常组织测不到其表达；而绝大多数癌组织存在survivin蛋白表达。顺铂(cisplatin，DDP)由于其抗肿瘤作用明显、价格低廉，并且可应用于多种肿瘤的

3、化疗，是目前临床上最常用的化疗药物之一。近年来对肿瘤化疗药物的研究表明，某些肿瘤细胞在长期应用顺铂后出现药物疗效下降，同时可检测到survivin的高表达。本实验通过将人工合成的survivinsiRNA经lip包裹后转染SGC7901细胞，探讨siRNA联合顺铂能否增强对SGC7901的抑制作用及诱导肿瘤细胞凋亡的能力，从而为临床胃癌的化疗开辟一条新路径。目的研究梯度浓度顺铂在不同时间下作用于SGC7901细胞，对其增殖抑制作用的影响；观察survivinsiRNA转染SGC7901细胞后survivin

4、表达的改变；检测细胞转染survivinsiRNA联合顺铂对该细胞抑制作用和早期凋亡率的变化。方法细胞培养：SGC7901细胞常规培养于含有10％胎牛血清(FBS)、100U／ml青霉素和100}tg／ml链霉素的RPMI1640培养液中，置于37。C、5％C02、饱和湿度培养箱中。通过lip包裹人工合成的survivinsiRNA转染SGC7901细胞，荧光显微镜下观察细胞形态及转染情况；MTT法检测各组肿瘤细胞的增殖抑制率(IR)；免疫细胞化学染色(SP法)、免疫细胞荧光染色和Westernblot分别

5、检i9lt]survivin蛋白的表达情况；Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态及流式细胞仪(FCM)检测细胞早期凋亡率。结果1．MTT检测结果：①顺铂对细胞的增殖抑制影响：与同时问点的control组相比，梯度顺铂组细胞增殖抑制率明显增高(P

6、抑制率与48h的相比，差异无统计学意义妒>o．05)。(D转染survivinsil矾A对细胞也有一定的增殖抑制作用，其作用强于lip组(9．194．1．48)％和siRNA组(5．004．1．55)％俨

7、胞中survivin蛋白表达明显少于control组、lip组和siRNA组。3．survivin蛋白表达的变化情况：①免疫细胞化学染色：与相同时间点control组相比，转染siRNA组和转染survivinsiRNA联合顺铂组细胞中survivin蛋白的表达明显降低(尸<0．05)，而顺铂组survivin蛋白的表达升高俨

8、vin表达量明显高于control组，而顺铂作用细胞后72h，细胞中survivin蛋白的含量高于作用细胞48h。差异均有统计学意义(P