IFN―γ和IL―1在鼻咽血管纤维瘤中的表达及其意义.doc

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1、IFN-Y和IL-1在鼻咽血管纤维瘤中的表达及其意义［摘要］目的检测丁•扰素-Y(interferon-丫，IFN-丫)和白细胞介素-1(interleukin1,IL-1)在鼻咽血管纤维瘤中的表达水平，探讨IFN-Y和1L-1在鼻咽血管纤维瘤骨质破坏机制中的作用。方法应用免疫组化SP法检测TFN-丫和TI-1在2000-2012年期间20例鼻咽血管纤维瘤和2015年3~6月期间10例正常下鼻甲组织中的表达。结果IFN-丫和1L-1蛋白在JNA中的阳性表达率均为100%,明显高于IFN-丫和IL-1蛋白在下鼻甲组织中的阳性表达率20%(P均0.05)o结论IFN-

2、丫和IL-1在鼻咽血管纤维瘤组织中阳性表达率较高，可能是参与鼻咽血管纤维瘤骨质破坏的相关因素。［关键词］干扰素-丫；白细胞介素T;鼻咽血管纤维瘤；免疫组化［中图分类号］R739.63［文献标识码］A［文章编号］1673-9701(2016)18-0001-03鼻咽血管纤维瘤(juvenilenasopharyngealangiofibroma,JNA)为鼻咽部最常见的良性肿瘤，常发生于10〜25岁的青年男性，由大量的血管、弹性纤维及致密结缔组织组成，Liang等［1］认为其木质是血管错构瘤。虽然JNA是良性肿瘤，但其破坏颅底及周围骨质可导致严重的并发症。JNA破坏

3、颅底骨质进行扩张性生长的机制尚未清楚。最近在研究病理性骨质破坏性疾病中发现IFN-Y和TL-1在胆脂瘤型中耳炎骨质破坏中发挥重要作用［2-4］oJNA的骨质破坏过程与服脂瘤的骨质破坏过程冇许多相似之处，它们都是良性肿瘤，都会破坏颅底骨质进行扩张性生长。本实验拟应用免疫组化染色SP法检测IFN-丫和IL-1在JNA组织中的表达，探讨英在JNA骨质破坏机制中的作用，现报道如下。1材料与方法1.1材料來源20例鼻咽血管纤维瘤标本来自于2000-2012年福建医科大学附属第一更院病理科，福建省耳鼻喉研究所石蜡包埋存档蜡块。鼻咽血管纤维瘤组：鼻咽血管纤维瘤患者标本共20例，

4、术后病理诊断均为鼻咽血管纤维瘤，患者年龄11〜35岁，平均18.5岁，其屮男20例，女0例。按Metin等［5］的肿瘤分期标准：I期7例，II期6例，III期6例，IV期1例。对照组10例下鼻甲组织术后诊断为下鼻中慢性炎症，患者年龄18〜40岁，平均25岁，其中男5例，女5例。标本来自2015年3~6月温州戻科大学附属第一医院耳鼻喉-头颈外科，在内窥镜下取鼻中隔偏曲伴下鼻中肥大患者的下鼻甲组织。标本均是24h内取材，应用4%甲醛固定，常规石蜡包埋，4um厚连续切片。1.2试剂兔抗人IFN-丫单克降抗体购自SANTACRUZ公司和兔抗人IL-1多克降抗体购自北京博奥

5、森生物技术有限公司。1.3免疫组织化学染色操作严格按照说明书进行，步骤如下：①烤片，68°C,20min；②常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯120min-二甲苯1120min-100%酒精I10min-100%酒精II10min-95%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min；③阻断灭活内源性过氧化物酶:3%H20237°C孵育10min,PBS冲洗3X5min；④抗原修复：置0.01M枸椽酸缓冲液(pH6.0)中煮沸(95°C,15-20min),自然冷却20min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min；⑤正常羊血清工作液

6、封闭,37°C10min,倾去勿洗；⑥滴加一抗4°C冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照)；滴加生物素标记二抗，37°C孵育30min,PBS冲洗3X5min；⑦滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素丁作液，37°C孵育30min,PBS冲洗3X5min；⑧DAB/H202反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。用PBS代替第一抗体作为阴性对照，用已知阳性片做阳性对照。1.4免疫组化结果判断[6]IFN-Y和IL-1的阳性染色者细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着，阳性细胞数：0分为无阳性细胞，1分为阳性细胞数75%

7、。染色强度：0分为无染色,1分为弱染色，2分为中等强度染色，3分为强染色。计算各抗体的阳性细胞数和染色强度得分，以3〜7分为阳性。1.5统计学分析应用SPSS13.0统计学软件进行分析，IF7-丫和IL-1阳性表达率采用x2检验或者精确概率法进行比较，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1IFN-Y和IL-1的阳性表达主耍位于J7A血管壁内皮细胞和基质成纤维细胞的胞浆屮，呈棕黄色。IFN-Y和1L-1在下鼻甲组织中弱表达或无表达，弱表达颗粒主要位于成纤维细胞胞浆、血管内皮细胞的胞浆和浆液性腺体屮，着色强度不一，见封三图lo分别对JM组和下鼻甲组的IFN-丫和

8、口-1阳性