姜黄素对脓毒症大鼠肝细胞线粒体膜通透性转换的作用机制研究-论文.pdf

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1、中华危重病急救医学2014年9月第26卷第9期ChinCritCareMed，September2014，Vo1．26，No．9·论著·姜黄素对脓毒症大鼠肝细胞线粒体膜通透性转换的作用机制研究陶砜尹海燕马永辉【摘要】目的研究线粒体膜通透性转换(MPT)与肝细胞凋亡及线粒体损伤之间的关系，初步探讨姜黄素对MPT的影响及其可能机制。方法将15只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组及姜黄素组，每组5只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型；假手术组仅开腹翻动盲肠，不进行结扎、穿孔。姜黄素组术前以100mg·kg·d。姜黄素溶于生理盐水至

2、10mL／kg，连续灌胃7d，其余组灌胃等量生理盐水。术后12h取肝组织，透射电镜下观察肝细胞线粒体形态学改变；采用钙离子荧光探针Fluo一3／AM检测细胞内游离ca+浓度；采用蛋白质免疫印迹试验(WesternBlot)检测活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase一3)和B细胞淋巴瘤一2基因(Bel一2)及其相关x蛋白(Bax)的蛋白表达；采用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)检测肝细胞活化easpase一3、Bcl一2、Bax的mRNA表达。结果透射电镜下观察假手术组细胞膜完整，胞质均匀，线粒体正常、清晰；脓毒症组肝细胞线粒体明显肿胀，内膜

3、嵴断裂或消失，双层膜结构消失；姜黄素组线粒体轻度肿胀，少数细胞出现线粒体肿胀，双侧膜结构不清。假手术组、姜黄素组、脓毒症组荧光强度指数依次增高，分别为417．33±15．88、772．95±42．37、1560．84±160．78(F=184．149，P=0．000o脓毒症组活化caspase一3和Bax的蛋白及mRNA表达最高，姜黄素组次之，假手术组最低[活化caspase一3蛋白(灰度值)：1．698±0．061、0．694±0．045、0．246±0．027，F=1289．667，P=0．000：活化easpase一3tuRNA(2-~tct)：1．

4、031±0．135、0．578±0．144、0．183±0．036，F-66．958，P=0．000；Bax蛋白(灰度值)：1．826±0．126、1．254±0．140、0．623±0．901，F=94．536，P=0．000；BaxmRNA(2-~cQ：2．774±0．338、1．661±0．226、0．656±0．114，F=124．710，P=0．000]，且各组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0．01)；而假手术组、脓毒症组、姜黄素组Bcl一2的蛋白及mRNA表达依次升高[Bel一2蛋白(灰度值)：0．716±0．091、1．328±0．14

5、7、1．656±0．104．F=84．918，P=0．000；Bcl一2mRNA(2)：0．617±0．118、1．393±0．096、1．650±0．167，F=83．846，P=0．000]。脓毒症组Bcl一2／Bax的蛋白及mRNA表达最低，假手术组次之，姜黄素组最高(Bcl一2／Bax蛋白(灰度值)：0．726±0．055、1．150±0．043、1．333±0．163，F=46．265，P=0．000；Bcl一2／BaxmRNA(2．幽)：0．505±0．041、0．944±0．097、1．006±0．168，F：12．211，P=0．001]。

6、结论MFr可导致线粒体功能损伤，并进一步引起肝细胞凋亡；姜黄素通过降低细胞内Ca2+浓度、促进抗凋亡基因Bcl一2表达以及抑制caspase一3活化和Bax基因表达，从而发挥调节MPT的作用。【关键词】脓毒症；肝细胞；姜黄素；线粒体膜通透性转换；天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶；Bcl一2：BaxStudyofthemechanismsofcurcuminonmitochondrialpermeabilitytransitionofhepatocytesinrats、thsepsisTaoPei，YinHaiyan，MaYonghui．Departmentof

7、IntensiveCareUnit。tAfiliatedHospitalofMedicalCollege五n吼University，GuangzhouRedCrossHospital，Guaugzhou510220，Guangdong，ChinaCorrespondingauthor：YinHaiyan，EmaiZ：yinhaiyan1867@sina．com【Abstract]0bjectiveTostudytheefeetsofmitochondrialpermeabilitytransition(MPT)onhepatocyteapoptosisan

8、dmitoehondrialdamage，andinvestiga