应用基因芯片技术筛选转染CDX2基因后胃癌细胞差异表达基因-论文.pdf

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1、·730·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jun；49(6)应用基因芯片技术筛选转染CDX2基因后胃癌细胞差异表达基因陈晓双，秦蓉，储婧，陈宗科摘要目的观察转染CDX2基因后人胃癌细胞系BGC一探讨CDX2在胃癌中的作用机制提供线索。823基因表达谱的变化。方法通过脂质体介导法转染关键词胃肿瘤；尾侧型同源转录因子_2；基因芯片；实时荧pEGFP．C1．CDX2和空载体pEGFP—C1至人胃癌细胞系BGC一光定量PCR823中，经G418筛选后获得稳定

2、转染细胞，逆转录一聚合酶中图分类号R735．2链反应(RT．PCR)检测CDX2基因的表达。应用人类表达谱文献标志码A文章编号1000—1492(2014)06—0730—05芯片Affymetrix2．0对两组细胞同时进行基因芯片分析，筛选出差异表达基因(以表达差异≥2．0或≤0．5倍为限)，选胃癌是源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，发病率居择部分差异表达基因进行实时荧光定量逆转录聚合酶链反我国恶性肿瘤首位。CDX2尾型同源盒转录因子2，应(Real—timePCR)验证。结果基因芯片筛选出CDX2转位于人类13

3、号染色体，属于ParaHoxcluster成员。染人胃癌细胞BGC一823差异表达基因599个，其中上调基因目前国内外普遍认为CDX2在肠黏膜上皮细胞的发275个，下调基因324个，这些基因主要涉及细胞增殖、分育及其形态和结构特征的维持过程扮演重要的作化、凋亡、信号转导、蛋白酶活性、肿瘤侵袭和转移等方面；用。前期研究⋯显示CDX2在正常胃黏膜组织、慢Real—timePCR检测部分差异表达基因DKK3、FOXP1、TWIST1、GATA6、RUNX3和BMP2，其结果与芯片结果一致，性浅表性胃炎中不表达，在

4、肠化组织中的表达明显确定芯片结果可靠。结论应用人类表达谱芯片成功筛选高于异型增生和胃癌，在胃癌细胞中CDX2过表达出CDX2转染人胃癌细胞BGC-823后差异表达基因，为深入明显抑制胃癌细胞增殖、降低其迁移能力。该文将CDX2基因和空载体分别转染至胃癌细胞系BGC一2014—02—17接收823中，构建实验组BGC．823／CDX2和阴性对照组基金项目：安徽省自然科学基金(编号：090413118)BGC一823／EV，利用基因芯片技术筛选CDX2转染人作者单位：安徽医科大学基础医学院病理学教研室，合肥23

5、0032胃癌细胞BGC．823后差异表达基因；应用实时荧光作者介绍：陈晓双，女，硕士研究生；秦蓉，女，副教授，硕士生导师，责任作者，E—mail：qin一定量逆转录聚合酶链反应(Real—timequantitativere—~onsO717@163．conversetranscriptasepolymerasechainreaction，Real—EfectsanditsmechanismofArctigeninonmousespleencellsLuMing，JiFeihong，ZhangLinjie(

6、DeptofImmunology，AnhuiMedicalUniversity，Hefei230032；ShanghaiGenhouseBiotechnologyCorporation，Shanghai201203)AbstractObjectiveToinvestigatetheeffectsofArctigenin(ATG)onconcanavalin(ConA)一stimulatedcellproliferationandcytokinesecretioninmousespleencells，andi

7、tspossiblemechanism．MethodsThetoxicityofATGonmousespleenceilswasdeterminedbyMTFassay．Theinhibitionofproliferationwasinvestigatedbytritiat—edthymidineincorporationmethod．Secretedcytokines(IFN一andIL-2)wereanalyzedbyELISA．Theassociatedproteinsandphosphorylati

8、onlevelsofmTORpathway(mTOR／P70S6K／Akt／AMPK／Raptor)weredetectedbyWesternblot．ResultsATGhadnosignificanttoxicitytomousespleencells．ATGsignificantlyinhibitedmouseprimaryspleenCellsproliferationinducedbyConA．ATGs