养殖斜带髭鲷源鳗利斯顿氏菌分离鉴定、系统发育分析及药敏试验-论文.pdf

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1、第36卷第3期海洋渔业Vo1．36．No．32014年05月M~-ineFisheriesMay，2014文章编号：1004—2490(2014)03—0252—08养殖斜带髭鲷源鳗利斯顿氏菌分离鉴定、系统发育分析及药敏试验郭睿(福州市海洋与渔业技术中心，福建福州350026)摘要：斜带髭鲷(Hapalogenysnitens)作为我国东南沿海主要海水网箱养殖鱼类之一，常年受到以细菌性病害为主的侵袭，但相关病原检疫和诊断的研究较少。本文以福建罗源湾养殖濒死斜带髭鲷为研究对象，无菌解剖后对其肝、肾和脾脏进行细菌分离，对纯培养菌使用

2、常规方法和API进行形态和生理生化鉴定，使用16SrDNA、gyrB和rpoD基因进行分子生物学鉴定和系统发育树构建及分析，并对该菌进行药敏试验。菌株鉴定结果为鳗利斯顿氏菌(Listonellaanguillarum)，但在系统发育树中与多株鳗弧菌(Vibrioanguillarum)聚为一支，药敏试验表明该菌对新生霉素、左氟沙星、罗红霉素、氟苯尼考等7种药物敏感，对磺胺甲基异恶唑、利福平、四环素、强力霉素、氨苄西林等8种药物耐药。关键词：斜带髭鲷；鳗利斯顿氏菌；鉴定；rpoD；药敏试验中图分类号：S941．42文献标识码：A斜

3、带髭鲷(Hapalogenysnitens)隶属于鲈形目肠炎病等的侵袭，但鲜有报道，故对其开展病原(Perciformes)，石鲈科(Haemulidae)，髭鲷属，俗检疫和诊断方面的研究势在必行，尤其要重视高称包公鱼、黑包公，是一种优质海水鱼，生长快温季节易发的弧菌病。速，肉质鲜美，备受消费者和养殖户青睐，自1995在海水养殖中弧菌病是最古老的鱼病之¨年福建省水产研究所育苗成功后，因具有较高的一鳗利斯顿氏菌(Listonellaanguillarum)作为，品质和优良的养殖性状，其养殖在我国南方沿海其中的主要致病菌，最早由CA

4、NESTRIN1分离鉴迅速推广¨J。目前，关于斜带髭鲷的研究大多停定，于1985年由MACDONELL等¨提议由弧留在养殖技术、人工繁殖及生理生菌属(Vibrio)转入现在的利斯顿氏菌属化等方面，在水产病原诊断方面的报道仅雷(Listonella)，该菌严重危害养殖和野生鱼类，燕等从斜带髭鲷组织器官鉴定出真鲷虹彩病AUSTIN等¨曾报道鳗利斯顿氏菌可以使超过毒RSIV，但病鱼外表无明显病变，解剖可见脾肿48种鱼类患病，现已包括北鲑(Stenodus大、胃空虚和肠道无食；江小斌对罗源湾养殖leucichthys)、虹鳟鱼(Onco

5、rhynch~myk~s)、日本鳗鲡斜带髭鲷幼鱼的鱼肠道弧菌(Vibrioichthyoenteri)(Anguillajaponica1)、香鱼(Plecoglossusahivelis)、花进行了分离鉴定，病鱼鳞片松动，鳃丝出血，解剖鲈(Lateolabraxjaponicus)、大西洋鳕鱼(Gadus可见肝、脾、肾肿大，肠道无食，有不同程度的腹morhua)、大菱鲆(Scophthatmusmaximtl~$)、牙鲆水，并从12月到次年5月均可检出。斜带髭鲷作(Paralichthysolivaceus)、大黄鱼(Pseu

6、dosciaena为我国沿海水产养殖的重要经济鱼类之一，在罗crocea)等，因此对弧菌病早期的预防和治疗十源湾海水网箱养殖区常年受到细菌性溃疡病和分必要收稿日期：2014—02—20基金项目：2013年福建省水生动物病害监测计划项目；2013年福州市渔业病虫害防治计划项目作者简介：郭睿(1986一)，男，河北石家庄人，助理工程师，硕士，主要从事水生动物遗传和疫病研究。E—mail：ariesgreen86@hotmail．corn第3期郭睿：养殖斜带髭鲷源鳗利斯顿氏菌分离鉴定、系统发育分析及药敏试验253本文对福建罗源湾网箱养

7、殖的濒死斜带髭10000r·rain离心30s收集菌体，按照细菌基鲷的主要脏器做了细菌分离，对优势细菌的纯培因组DNA提取试剂盒(百泰克，北京)提取基因养物使用API细菌鉴定条以及16SrDNA、和组DNA，作为PCR模板，一20cc保存备用。rpoD基因进行分子鉴定，并构建系统发育树以研1．3．216SrDNA、和rpoD基因序列的扩增究该菌的分类地位，同时通过药物敏感性试验对与测序该菌进行敏感药物筛选，旨在为养殖斜带髭鲷的扩增16SrDNA基因所用引物为细菌16S病害监测及科学用药提供依据。rDNA通用引物27F和1492R

8、，扩增gyrB和rpoD基因所用引物参考YAMAMOTO等。引物序1材料与方法列、退火温度及扩增片段大小见表1。PCR反应1．1样本采集及细菌分离体系(50L)包括：2XTaqPCRMasterMix(天濒死斜带髭鲷于2013年6月采自福建罗源根，北京)25／z