金鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验-论文.pdf

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1、第33卷第6期永产科学Vo1．33NO．62014年6月FISHERIESSCIENCEJun．2Ol4金鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验周毅，张培培。，徐晔，曹洁，孟学平。，段宏安(1．连云港出人境检验检疫局，江苏连云港222042；2．淮海工学院海洋学院，江苏连云港222005)摘要：自病死金鱼肝脏中分离到一株优势菌，对其进行感染试验、培养特性观察、生化特性鉴定及16SrRNA序列分析。试验结果表明，该分离菌株为嗜水气单胞菌，与已报道的嗜水气单胞菌的16SrRNA序列同源性>99．3。用纸片扩散法进行药敏试验，试验结果显示，该分离株对四环素类、喹诺酮

2、类、磺胺类、头孢呋新、头孢他啶、头孢吡肟等21种药物敏感，对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、林可霉素、麦迪霉素耐药。本次金鱼发病是由嗜水气单胞菌感染引起，可选用强力霉素、麦迪霉素、复方新诺明、磺胺甲基异恶唑、阿奇霉素、恩诺沙星、诺氟沙星等多种药物进行防治。关键词：金鱼；嗜水气单胞菌；分离；鉴定；16SrRNA；药敏试验中图分类号：S9l7文献标识码：A文章编号：1003—1l11(2O14)06—0379—06嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)属弧菌限公司。科、气单胞菌属，为革兰氏阴性短杆菌，极端鞭毛，1．2病原菌的分离纯化无芽

3、孢，无荚膜，广泛分布于水体环境中[1]。气单无菌解剖病死金鱼，取肝脏划线接种于营养琼胞菌属的细菌根据其有无运动力分为嗜冷性、非运脂平板，28℃培养24h，挑取单个菌落进一步纯化。动性的气单胞菌和嗜温性、运动性的气单胞菌，嗜1．3感染试验水气单胞菌属运动性菌，是气单胞菌的模式种。]。选取健康的金鱼为试验对象，设试验组和对照嗜水气单胞菌对水产动物、畜禽和人类均有致病组，每组1O尾鱼。将分离纯化的细菌用无菌生理性，是一种典型人一兽一鱼共患病病原菌[8。实盐水配置成密度为1．5×10cfu／mL(0．5麦氏单验室接收一批送检的金鱼(Carassiusauratus

4、)，暂位)的菌悬液，以腹腔注射方式感染，接种量为0．1养时出现大量死亡，呈出血性败血症。由病死鱼肝mE／尾；对照组每尾注射等量无菌生理盐水。连续脏中分离到一株优势菌，经感染试验，证实该分离充气，观察记录试验鱼患病症状和死亡情况，并选株具有较强的致病力，并通过培养特性、生理生化取病死金鱼进行细菌分离和鉴定，观察分离菌株在特性和系统发育学的研究，对分离株进行鉴定，同形态及生理生化特性上是否与原分离菌株一致。时对分离株进行药物敏感性试验，旨在为嗜水气单1．4培养特性观察胞菌的检验、防治和进一步的研究提供参考。挑取纯化菌落，分别接种氨苄青霉素麦康凯琼脂培养基、TC

5、BS琼脂培养基和5绵羊血琼脂培1材料与方法养基平板上，于28℃分别培养24~48h，观察菌落1．1材料特征。营养琼脂、氨苄青霉素麦康凯琼脂、5绵羊血1．5生理生化鉴定平板、三糖铁琼脂、TCBS琼脂、革兰氏染色液等购挑取纯化菌落，接种于三糖铁琼脂培养基斜自北京陆桥技术有限公司；革兰氏阴性菌鉴定卡购面，28℃培养18～24h，观察结果。根据革兰氏染自梅里埃生物公司；TaqDNA聚合酶、dNTPs、10×色结果，应用全自动微生物分析系统对菌株进行PCRBuffer等购自宝生物工程(大连)有限公司；鉴定。16SrRNA特异性引物由上海道龙生物科技有限公司合成；29

6、种药物药敏纸片购自杭州微生物试剂有收稿日期：2013—11—18；修回日期：2013-12—16．基金项目：质检公益性行业科研专项资助(201110037)；江苏检验检疫局科技项目资助(2013KJ02)．作者简介：周毅(198o一)，男，兽医师；研究方向：水生动物检疫．E-mail：1816008496@qq．tom．通讯作者：段宏安(1967一)，男，研究员；研究方向：水生动物疾病．E—mail：honganduan@qq．corn．第6期周毅等：金鱼嗜水气单胞茵的分离鉴定及药敏试验3812．5药敏试验结果迪霉素耐药，对头孢噻吩和新霉素中度敏感，对四根

7、据药敏纸片生产厂家的抑菌圈判断标准判环素类、喹诺酮类、磺胺类、头孢呋新、头孢他啶、头断药物的敏感性。嗜水气单细胞菌AH—TC对青霉孢吡肟等21种药物敏感(表3)。素G、氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、林可霉素、麦表1生化反应结果孔号中文名称结果孔号中文名称结果孔号中文名称结果a一丙氨酸一苯丙氨酸一脯氮酸芳胺酶218一木糖苷酶一42琥珀酸盐产碱+3侧金盏花醇一228一丙氨酸芳胺酶一43N一乙酰一半乳糖胺酶一4L一吡咯烷基芳胺酶一23L_脯氨酸芳胺酶+44半乳糖苷酶一5L-阿拉伯醇一26脂酶+45磷酸酶一7I)_纤维二糖一27古老糖+46氨基乙酸芳胺酶一98一半

8、乳糖苷酶+29酪氨酸芳胺酶+47鸟氨酸脱羧酶一lOH2S产生一3l