兔关节软骨撞击损伤的动物模型的建立及评价-论文.pdf

《兔关节软骨撞击损伤的动物模型的建立及评价-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、哩医，药杂志2014年7月第43卷第l4期ShanxiMedJ，July2014，Vo1．43，No．14·基础研究·兔关节软骨撞击损伤的动物模型的建立及评价高宏关节软骨损伤因其早期发病隐匿，不易发现，1．4．1实验模型的建立：用5水合氯醛(1．25病理标本不易获得，临床早期诊断困难，在人群中mL／kg)兔腹腔内注射麻醉后，仰卧位，双膝关节脱研究有一定难度，而使用动物模型则可以采用多种毛，常规消毒铺巾，兔膝关节内侧纵形切口，长约3有效手段，按研究的需要进行全过程的观察，并可cm，依次切开皮肤、皮下组织、关节囊后，将兔髌骨采取相应的措施控制偏倚因素。因此，动物模型可外翻，膝关节屈曲12O。，

2、使股骨干呈90。，骨盆固定以作为研究关节软骨损伤重要而有效的手段。有带固定骨盆，大腿固定带固定大腿，用1．33kg和学者采用撞击的方法建立兔膝关节软骨损伤动物0．43kg撞击物分别从46cm和2Ocm高处通过导模型，操作简单，与人类关节软骨损伤的病变过程杆坠落，通过直接撞击体撞击股骨内侧髁，造成股基本相似，具有良好的可比性，并可同期获得同一骨内侧髁软骨的不同的损伤撞击。我们实验室前实验动物正常膝关节滑液的标本，是很好的动物实期进行大体观察和组织学观察，证实所采用的质量验模型。本研究旨在验证该动物模型的可靠性、可和撞击的强度适中，没有造成软骨下骨折，是较为操作性和可重复性，以保证后续实验的准

3、确性，提理想的研究创伤性骨关节炎病理改变与发病机制高实验结果的可信度，为进一步研究关节软骨损伤的动物模型。的发病机制打下基础和治疗提供理论依据。1．4．2关节的大体观察：观察撞击后软骨面的平1材料与方法整度，是否有关节面的裂隙和软骨剥脱现象，矢状1．1试剂与仪器面剖开股骨内侧髁，观察断面软骨下骨有无骨折。Lieca切片机(德国Leica公司)；Hitachi一6001．4．3组织学观察：取股骨内侧髁，行矢状面剖透射电镜(Et本Hitachi公司)；显微摄影仪(日本开，一半立即放入4的中性甲醛溶液中固定24OlympusAU一8O)。h，固定完成后，放入1O的中性乙二胺四乙酸1．2实验动物(

4、EDTA)溶液中，在0℃下脱钙4周，每日搅拌，每实验动物选用四川I大学华西医院动物实验中周更换2次脱钙液，使其充分脱钙，用针刺法判定心提供的健康成年新西兰大白兔6只，体质量在脱钙终点，梯度脱水1周，干燥后石蜡包埋组织块，3．0～3．5kg，雌雄不限。试验前在笼子内圈养1切成5m的病理片，再经系列的二甲苯、梯度浓度周，观察无明显疾患、无关节运动异常者方可纳入酒精脱水，苏木素染色10min，分色，固定后伊红染本实验。实验用饲料由华西医院动物中心提供。6色5min，彻底冲洗，再由低到高的梯度尝试酒精和只新西兰白兔，双侧行关节腔暴露，右侧做低能量二甲苯脱水，干燥，透明，上胶，封片行显微镜检查。(0

5、．6J)的撞击，左侧做高能量(6．3J)的撞击。股骨的另一半标本用刀片修整后，2．5戊二1．3损伤装置醛固定24h，1锇酸固定2h后，乙醇逐级脱水，放置兔的底盘、固定支架、骨盆固定带、大腿固醋酸异戊酯置换酒精，二氧化碳临界点干燥，镀金，定带垂直导杆，质量分别为1．33kg和0．43kg的Amrayq000B扫描电镜观察并照片。撞击物，直接撞击体(为了保证兔股骨内侧髁软骨2结果受力的均匀一致，应用骨水泥按照股骨内侧髁的解2．1大体观察：高能量组和低能量组标本关节软剖形态塑形而成)。骨表面光滑光洁，呈白色半透明状，未见关节表面1．4方法裂隙，软骨质韧有弹性，剖面软骨和软骨下骨完整，无裂隙，软骨

6、下骨与软骨的界限清楚，见图1，2。基金项目：山西省卫生厅科研课题(201301082)2．2苏木素一伊红(HE)染色组织学观察：6个低能作者单位：030001太原，山西医科大学第一医院骨科量撞击的标本中，软骨无裂隙，细胞层次结构清晰，山西医药杂志2014年7月第43卷第l4期ShanxiMedJ，July2014，Vo1．43，．!浅表层的细胞扁平，与关节软骨的表面平行排列，在活体内进行的关节软骨损伤的动物模型由中间层的细胞较大而圆，辐射层的细胞呈柱状排于可以观察关节软骨损伤后长期的病理改变，所以列，垂直于软骨表面，钙化层紧靠贴软骨下骨，未见在研究中常用，分为开放关节损伤和闭合关节损伤骨折

7、线，见图3。6个高能量撞击的标本中，软骨细模型。为了保证作用于关节软骨表面撞击力的均胞层次清晰，钙化层和软骨下骨均未见断裂，软骨匀一致，往往先做一个与实验动物关节面相匹配的的浅表层可以看到走行斜行的裂隙，裂隙未穿过软撞击体，这种实验结果与临床关节软骨损伤结果十骨下骨，见图4。分相似。Zhang等和Vrahas等应用预前制作2．3扫描电镜观察：6个低能量撞击的标本中，软与兔股骨内侧髁相吻合的撞击体研究暴露关节腔骨表面光滑，