糖原合成酶激酶3β抑制剂CHIR99021诱导人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞-论文.pdf

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1、2014年6月第3卷第3期ChinJHcoatSurl~(ElectronicEdition)June20】4Vb1．3No．3·47·基础研究·糖原合成酶激酶3抑制剂CHIR99021诱导人胚胎干细胞分化为限定内胚层细胞杜聪邱东波蔡楠王亚彬奉源张琪项鹏易慧敏【摘要】目的探讨糖原合成酶激酶(GSK)3p抑制剂CHIR99021诱导人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞的可行性。方法将人胚胎干细胞H1细胞置于无滋养层培养基(Essential8)培养。采用免疫荧光法检测人胚胎干细胞多能性标志物Oct4、Nanog的表达。于细胞中加入0．33、1．00、3．00、9．00、27．00~tmol

2、／L浓度的CHIR99021培养3d，以不加CHIR99021的细胞作对照。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞多能性相关基因OCT4、SOX2和限定性内胚层相关基因GATA4、SOX17的表达水平。实验数据比较采用单因素方差分析和LSD—t检验。结果免疫荧光法能够检测到人胚胎干细胞多能性标志物Oct4、Nanog的表达。经0．33、1．00、3．00pmol／LCHIR99021处理后的人胚胎干细胞生长状态良好，CHIR99021浓度较高时细胞生长状态较差或死亡。经1．00、3．00gmol／LCHIR99021处理后的细胞多能性相关基因OCT4表达均下调(LSD一，：一40．

3、54，一59．12；l<0．05)，SOX2表达亦明显下调(LSD．，=一20．46，一3．87；I<0．05o经1．00、3．00~maol／LCHIR99021处理后的细胞限定性内胚层相关基因GATA4表达上调(LSD—t=-137．21，65．29；尸

4、ase3pinhibitorCHIR99021induceshumanembryonicstemcellstodifferentiateintodefinitiveendodermcellsDuCong',QiuDongbo，CaiNan，WangYabinFengYuanZhangQi，XiangPeng,YiHuimin．。CenterforStemCellBiologyandTissueEngineering,SunYat—senUniversity,Guangzhou510080，ChinaCorrespondingauthor．"Huimin，Email．ylhmin@hot

5、mail．com【Abstract1ObjectiveToinvestigatethefeasibilityofglycogensynthasekinase(GSK)30inhibitorCHIR99021induceshumanembryonicstemcellstodifferentiateintodefinitiveendodermcells．MethodsHumanembryonicstemcellsH1cellswereculturedinfeeder-freemedium(Essential8)．Theexpressionofhumanembryonicstemcellpl

6、uripotencymarkersOct4，Nanogweredetectedbyimmunofluorescence．HumanembryonicstemcellsweretreatedwithCHIR99021ofdiferentconcentrations(0．33，1．00，3．00，9．00，27．00pmol／L)andculturedfor3drespectively．Theuntreatedcellsweretakenascontro1．TheexpressionlevelsofpluripotencyDoI：10．3877／cmad．issn．2095-3232201

7、403013基金项目：国家自然科学基金面上项目(81370555，81170452)；广东省自然科学基金杰出青年基金项目($20120011190)；广东省科技计划项目(2009B060700109)；霍英东教育基金会第十四届高等院校青年教师基金基础性研究课题(141032)作者单位：510080广州，中山大学干细胞与组织工程研究中心(杜聪、项鹏)；中山大学附属第医院细胞与基因治疗转化医学中心(邱东波、蔡楠、王亚彬、奉源、张琪)，外科重症监护病