水貂肺炎双球菌的分离与鉴定-论文.pdf

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1、2014年第6期(总第209研究水貂肺炎双球菌的分离与鉴定秦绪伟禚宝山(齐鲁动物保健品有限公司山东济南250100)摘要本试验从诸城一水貂厂发病水貂分离到一株细菌，经解剖、细茵分离、镜检、生化试验确诊为肺炎双球菌，经药敏试验采取综合治疗方案，最终控制了病情。关键词水貂双球菌肺炎鉴定中图分类号：$852．611文献标识码：A文章编号1007．1733(2014)06．0011．02肺炎球菌又称肺炎双球菌，属于革兰氏阳性球菌中1．2．2细菌的生化试验将分离菌接种于加血清的马丁链球菌属【1】，在自然界

2、中分布广泛，可引起各种动物的大肉汤培养基37~C恒温摇床震荡培养24h，取培养液0．2ml接叶性肺炎或者脑膜炎，亦可致幼兽肺炎或者败血症临种于乳糖、葡萄糖、麦芽糖、菊糖、棉实糖、海藻糖、床上很少会见到急性发病案例，多种健康动物的呼吸道梨醇、甘露醇、触酶试验、七叶苷、胆盐等微量生化反可以分离到肺炎双球菌，一般不作为致病菌，只有条件应管，培养24h记录各种生化管的反应情况。恶劣机体抵抗力差的时候才会发病。此次水貂养殖场发1．2．3细菌的分子生物学鉴定16SrRNA：无菌挑取平生急性死亡、口鼻流血的病

3、例，经诊断确诊为肺炎双球板上的菌落加入到lml无菌水中，震荡混匀后沸水浴菌病。7min，冰浴5min，离心上清作为基因扩增的模板，设计1材料与方法引物：F1．5’AGAGTTTGATCCTGGCTCAG．3’，R1．1．I材料5’ACGGCTACC兀GTrG11．ACGACT13’，PCR反应1．1．1试验菌株来自于山东诸城一水貂养殖场，养殖体系(50u1)：10PCRBufer(含MgCI215mmol／L，KCI500水貂3000只，咳嗽、口鼻出血，发病水貂经解剖无菌条mmol／L)5ul，

4、2．5mmol，LdN11P4ul，引物(2Oumo~)各lul，件分离肺脏、气管，获得～株细菌。模板2ul，ddH2036．8ul，Taq酶(SU／u1)0．25ul。PCR反应条1。1．2其他材料营养琼脂、ss琼脂、麦康凯琼脂等购件：94℃5rain；94℃lmin，56℃30s，72℃1．5min，30自青岛海博生物技术有限公司；微量生化试剂管购自北个循环；72℃10min。取PCR产物5ul用1％的琼脂糖凝胶京路桥技术有限责任公司；药敏纸片购自杭州天和微生电泳检测，PCR产物送交上海基因

5、测序公司进行测序，将物试剂公司；其他实验室常规试剂。测序结果提交Genbank~行比对，构建系统发育树，判定1．2方法细菌的系统发育地位，以97％相似性为界限判定为何种1．2．1细茵的分离培养与镜检无菌条件下取水貂的肺菌。脏，切开后在血清营养琼脂涂抹，37"C恒温培养箱培养1．2．4细菌的药敏试验无菌取血清平板上的典型菌24h，将分离菌接种于血清营养琼脂、鲜血平板、麦康凯落，在平板上均匀涂抹，将标准化的药敏片贴在平板琼脂、SS琼脂，37"C恒温培养箱培养24h观察生长情况。上，37"C恒温培养箱

6、培养24h，使用直尺测量抑菌圈的直取血清平板上典型的菌落，进行革兰氏染色，油镜镜检。径，观察细菌对各种药敏片的敏感程度。-JiJ-j-Ji

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9、IJIJi，I效减少仔猪发病率和死亡率，显著促进仔猪生长与提高参考文献饲料利用效率，值得在养殖业中推广应用。⋯I姜天团，王爱国，张鑫等．中草药添加剂对断奶仔猪生产性能的影

10、表2中草药添加剂对仔猪生产性能的影响响[J】．中国畜牧杂志，2011，47(11)：57—59．[2】徐文龙．我国中草药饲料添加剂的研究概述【丁】_畜牧与饲料科学，2009，30(2)：21-22．[3】李勤建．中草药饲料添加剂在养殖生产中的应用明．四川畜牧兽医，2000，27(4)：31-32．[4]周维仁，李优琴，樊磊．中草药饲料添加剂及其研究进展．畜禽业．2000(1)：34·37．【5】汪义金，高仲平，王娜等．中草药饲料添加剂的研究概况【J】．畜牧注：数据右上角相同小写字母表示差异不显著

11、(P>O．05)，不同小写与饲料科学．2010，31(5)：73．75．字母表示差异显著(P<0．05)。(收稿日期：2O12_25)山东畜牧兽医2014年第35卷1．2．5细茵的毒力试验在无菌条件下使用接种环挑取3讨论单个菌落，接种于马丁肉汤培养基，37℃恒温摇床震荡3．1肺炎双球菌的分离鉴定培养24h，100倍稀释后腹腔注射小白鼠，0．3ml／只共计5此次水貂发病为激素水貂，天气比较热，正值换毛只，连对照组2只一起饲养，注射后观察7日。期间，换毛引起的机体抵抗力差，呼吸道的正常菌群大2结果与