文蛤坎氏弧菌的分离鉴定-论文.pdf

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1、山东畜牧兽医2014年第35卷文蛤坎氏弧菌的分离鉴定王雪鹏(山东农业大学动物科技学院泰安271018)柴雪良闫茂仓(浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室温州)摘要本文从江苏文蛤养殖区发病丈蛤中分离到l株优势菌，人工感染显示菌株能引起供试文蛤发病，死亡率为68．75％，且发病症状与原发病症状相同，提示该菌是引起文蛤大面积死亡的主要致病菌。对其形态、生理生化特征致病性进行了初步研究。结果显示分离菌株为革兰氏阴性茵，直杆状，主要生理生化指标赖氨酸脱羧酶、硝酸盐还原、甘露糖、氧化酶为阳性，精氨酸脱羧酶、鸟氨酸酸脱羧酶、V．P为阴性。结合革兰氏染色、形态、生理生化特点，最

2、后鉴定该分离菌株为坎氏弧菌。关键词文蛤坎氏孤茵16SrRNA中图分类号：$852．613文献标识码：A文章编号：1007—1733(2014)06—0022—02文蛤(Meretrixmere~ixLinnaeus)是我国沿海常见的一光泽，表皮部分脱落、表面粘液较少，解剖发现外套膜种重要经济贝类，因其肉质细嫩、营养丰富，深受国内萎缩，闭壳肌松弛、开合无力，有些发烂发白，软体部外消费者欢迎，是出口创汇的重要水产品之一。文蛤养消瘦，颜色淡红，血管无色，部分病蛤腮黏液明显增殖在我国已有多年的历史，随着国际市场对文蛤需求量多。的不断增长，我国的文蛤养殖业得到了迅速发展，但是1

3、．2分离方法无菌盐水洗净，用70％的酒精棉球对体近l0几年来，随着文蛤养殖规模的逐年扩大，养殖环境表擦拭消毒，无菌手术刀开启，取肝胰脏等部位无菌匀恶化导致微生物疾病的流行而引发的养殖文蛤的大规模浆器中匀浆处理，zobell2216E平板和TCBS平板划线接死亡屡屡发生，已造成巨大的经济损失，全国养殖贝类种，28~C培养24h后，选取优势菌落进行重复划线纯化，因微生物疾病导致死亡而造成的经济损失保守估计每年纯培养物于4~C冰箱中保存。达到2O～30亿元¨】。而弧菌(Vibrio)是导致文蛤发病的主要1I3人工感染试验人工感染试验在20L水族箱中进行，致病菌，发病的文蛤表

4、现为不能潜入沙中，双壳不能紧温度28~C，盐度26．4，pH8．2，连续充气，每组放l6只2cm闭，壳边缘有许多粘液，消化道内细菌大量繁殖【2]，国内大小的文蛤。换水1次／d，试验组调节水体中细菌浓度为外的报道有副溶血弧菌【‘6l和弗氏弧菌【，郑国兴等【发现10cf~ml，投单胞藻1次／d；对照组不加入菌体，按上述导致江苏沿岸文蛤大规模死亡的病原菌为溶藻弧菌，而方法饲养；连续观察12d，纪录死亡状况，并进行解剖和坎氏弧菌作为文蛤病原菌的研究还未见报道。本研究对病原的再分离以确定是否死于攻毒活菌引起的感染。发病文蛤优势菌株进行分离、鉴定，并进行人工感染试1．4细菌鉴定按

5、一般细菌常用鉴定方法fl。】进行分离菌验，探讨分析导致文蛤大规模死亡的病原，旨在为文蛤的生物学性状测定，包括革兰氏染色、形态观察、生理疾病研究提供理论依据，为文蛤健康养殖提供参考。生化特性测定。1材料与方法2结果与分析1．1发病文蛤症状患病文蛤(壳长2cm左右、花色暗淡无2．1细菌分离及其形态特征经分离纯化后，从病蛤中基金项目：浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室开放基金(J2013006)；浙江省科技计划项目(2012C22072，2012F20029)；浙江省自然科学基金fY14C190013)．·通讯作者I．IL-ILl-Lt-tI_t_．I_I_LtI_

6、-I__L_L-L_I_l_L-L_I_-tL■—L-tL●_-●l_L-．-L_I_t_L_■L●t-_I_LL-I_LLL-tItL-__L_t．L_t-●__l_■EM益生菌很快在仔猪肠道内定植，与肠黏膜上皮紧密结ementinrmnbowtroutbypotentialprobioticbacteria[J]．FishShellfish合形成生物屏障，产生有机酸、降低肠道pH及氧化还原lmm~ol，2003，15(5)：443452．电位，抑制有害菌的侵入，从而达到预防腹泻的目的。[4】孔海英，孟宪梅．动物微生态制剂的研究进展及发展应用前景[J】．参考文献吉林

7、粮食高等专科学校学报，2006，21(I)：4-7．[1]张丽芳，王占武．戊糖乳杆菌制剂防治仔猪腹泻效果初探[J]_中[5】林元银，邹绮玉，周亦飞．．抗生素添加剂的负面效应及其主要替国微生态学杂志，2008，20(6)：568～570．代品的研究研究前景[J】．饲料广角．2001(2)：18—21．[2]王桂瑛，刘燕．益生素的研究及应用进展[J]．饲料博览，2004(6)：[6】赵青．早期断奶仔猪腹泻病药物防治试验[J]．浙江农业学报，4—6．2005．17(2)：90—93．[3】NikoskelamenS，ouweh．dndAC，BylundG，