树鼩IL-2TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立-论文.pdf

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1、2013年7月中国比较医学杂志July，2013第23卷第7期CHINESEJOURNALOFCOMPARATIVEMEDICINEV0l_23No．7树晌IL一2TaqMan探针实时荧光定量RT．PCR检测方法的建立黄晓燕，徐娟，王文广，殷安国，李晓飞，孙晓梅，夏雪山，代解杰(1．中国医学科学院／北京协和医学院医学生物学研究所，云南省重大传染病疫苗研发重点实验室，树的种子资源中心，云南昆明650118；2．昆明理工大学生命科学与技术学院，云南昆明650500)【摘要】目的建立检测树购IL一2基因TaqMan探针实时荧光定量PCR方法

2、。方法以经ConA诱导培养的树嗣淋巴细胞总RNA为材料，设计特异性引物，通过RT．PCR技术克隆出树的IL．2基因，以构建的树钧IL-2基因质粒为标准品，建立标准曲线，并进行灵敏度检测。结果建立了树鼢IL一2基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法，此法检测灵敏度高，线性范围可达1O～10拷贝／ul。结论成功建立了树鼢IL-2实时荧光定量PCR方法，此方法灵敏度高、特异性强，检测周期短，为探讨IL-2作用的分子作用机制奠定基础。【关键词】树晌；IL-2；实时荧光定量PCR【中图分类号】R．332【文献标识码】A【文章编号】1671-

3、7856(2013)07-0036-05doi：10．3969．j．issn．1671．7856．2013．007．009Establishmentofareal-timeflurescentquantitativeRT-PCRassayfordetectionoftreethrewIL-2geneHuangXiao—yan，XuJuan，WangWen-guang。，YinAn-guo，LiXiao·fei。，SunXiao-mei，XiaXue—shan，DaiJie-jie(1．CenterofTreeShrewGermplas

4、mResources，InstituteofMedicalBiology，theChineseAcademyofMedicalScienceandPekingUnionMedicalCollege．YunnanKeyLaboratoryofVaccineResearchandDevelopmentonSevereInfectiousDiseases．Kunming6501182．FacultyofLifeScienceandTechnology，KunmingUniversityofScienceandTechnology，Kunmi

5、ng650500，China)【Abstract】OMectiveToestablishareal-timefluorescentquantitativeRT-PCRassaytodetecttreethrew(tupaiabelangeri)IL-2．MethodsTotalRNAwasisolatedfromConA-stimulatedtreeshrewsspleenlymphocytes．Theconservativeencodingsequenceofinterleukin-2(IL-2)wasamplifiedbyRT-P

6、CR，andsuccessfullyclonedintopMD-19Tvector．TheestablishedIL-2genevectorwasusedasstandardsubstanceandthestandardcurveswereestablishedforthesensitivityevaluation．ResultsAreal—timefluorescencequantitativeme~odoffast，sensitiveandreliabledetectionsystemwassetup．Thesensitivity

7、ofthismethodforcreatingIL-2geneoftreeshrewwas10一10copies．ConclusionsAreal—timefluorescencequantitativemethodoftreeshrewIL-2wassuccessfullyestablished．ThissensitivemethodcanserveasamolecularfoundationforthestudyofIL-2anditsroleinmanyclinicaldiseases．[基金项目】国家科技支撑计划项目(编号：2

8、009BAI83B02-21；2011BAIl5B01-21；2012BAI39B01)；云南省科技计划重点项目(编号2006PT07—2)；云南省应用基础面上项目(编号：2011FZ211)。[作者简介]黄晓燕，女f，