树鼩轮状病毒分离及rt-pcr检测方法建立

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1、中国图书资料分类号：&(81-学校代码：10679密级：学号：Y2012105092015届硕士学位论文树齣轮状病毒分离及RT-PCR检测方法建立IsolationandEstablishmentofaRT-PCRdetectionassayforTupaiarotavirus学院（所）：公共卫生学院专业:流行病与卫生统计学研究方向：疾病预防与控制年级：2012级研究生：罗军指导教师：宋志忠教授2015年6月5日声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和

2、致谢的地方外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大理学院或其他教育机构的学位或证明而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明，并表示了谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。研究生签名：『日期」。吟，A-S"论文使用和授权说明本人完全了解大理学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文复印件和论文电子版：允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文；授权学

3、校将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。(保密的论文在解密后应遵循此规定）、一X(Jc^nu研究生签名：名导师签名:日目录中文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1英文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3前言．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

4、．．．．．．．6轮状病毒流行病学概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

5、．．．．．．31结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33参考文献．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34论文综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36附录．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

6、．．．．．．．．．．．．．．．．42致谢．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45-中文摘要树鼩轮状病毒分离及RT-PCR检测方法建立研究生：罗军导师：宋志忠指导老师：代解杰、孙晓梅目的：明确实验树鼩轮状病毒的感染情况，建立树鼩轮状病毒快速、简便的PCR检测方法，为今后进行树鼩轮状病毒分子流行病学研究以及制定实验树鼩的国家质量标准，规范和监管质量提供依据。为轮状病毒感染机制的研究以及相关疫苗和药物的研发提供有价值的数据资料。方法

7、：1.采集捕获的野生树鼩血清样本及粪便样本360份.2.通过ELISA方法以及胶体金法对样品进行轮状病毒携带的初步筛选。3.利用Triol法和体液病毒DNA/RNA小剂量试剂盒(AxyPrep)提取粪便样品中的病原RNA.4.根据轮状病毒基因9（G9），糖蛋白VP7基因的保守区域序列(GenBankM21843)设计合成RT-PCR引物，对树鼩粪便的病原RNA进行RT-PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳得到所需的目的片段（365bp）。5.将目的片段利用纯化试剂盒纯化后做胶回收处理并送测序公司进行基因测序。6.将测序为阳性的

8、粪便样品通过离心、过滤，接种到MA104细胞上进行扩增培养。7.提取细胞病毒液中的RNA分别做RT-PCR检测方法的特异性和灵敏性实验。结果：1.采集的360份粪便样品和血清样品通过胶体金和ELSA方法未检测到树鼩轮状1-病毒阳性。2．通过RT-PCR方法检测到一份阳性样品，片段大小为365bp做胶回收并送测序公司测序，测序结果在