人TRAIL胞外区原核可溶性表达及活性鉴定-论文.pdf

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1、河南大学学报(医学版)2014年5月第33卷第2期117人TRAIL胞外区原核可溶性表达及活性鉴定鲍应环，程相树，刘峰涛(河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室，河南开封475004)摘要：目的获得具有生物活性的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)胞外段蛋白。方法根据大肠杆菌密码子偏爱性要求，设计合成编码TRAIL胞外段的DNA序列，构建成pET3Oa_TRAIL胞内融合表达质粒，重组质粒转化表达宿主E．coliBL21。在不同温度、不同浓度的IPTG条件下诱导表达TRAIL，sDS-PAGE分析表达产物，MTT法检测产物活性。

2、结果构建的工程菌株表达29KD的可溶性TRAIL融合蛋白，能诱导Jurkat细胞凋亡。结论成功表达了人TRAIL胞外段蛋白，为进一步研究提供基础。关键词：TRAIL；原核表达；Jurkat细胞；凋亡中图分类号：Q782文献标识码：A文章编号：1672—7606(2014)O2一O117一O3ExpressionthetracellulardomainofhumanTRAILandidentificati0n0fitsactivityBAOYinghuan，CHENGXiangshu，LIUFengtao(KeyLaboratoryo

3、fCelluarandMolecularImmunology，Institutionofimmunology，MedicalSchoolofHenanUniversity，Kang，Henan475004，China)Abstract：ObjectiveToobtaintheextracellulardomainoftumornecrosisfactor—relatedapoptosis—inducingligand(TRAII)withactivity．MethodsWedesignedandsynthesizedDNAencod

4、ingtheTRAIIextracellularDNAsequencesaccordingtothecodingpreferenceoftheE．coliandconstructedtheprokaryoticexpressionvector：thepET30aTRAILfusionexpressionplasmid．TherecombinantplasmidwastransformedintotheexpressionhostE．coliBL21toinduceexpressionunderdifferenttemperature

5、conditions，differentconcentrationsofIPTGandalcoho1．AfterinducingexpressionweusedtheSDS-PAGEmethodtOanalysisofexpressionproductandusedtheMTTmethodtoassaytheactivityofexpressionproduct．ResultsTheconstructedengineeringbacteriaexpresseda29KDsolubleTRAILfusionprotein，andthi

6、sproteincaninduceJurkatcellapoptosis．ConclusionWesuccessfulexpresstheextracellulardomainofhumanTRAILproteinwithactivities．Keywords：TRAIL；Prokaryoticexpression；Jurkatcells；Apoptosis；apoptosis肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF—re—聚化并起始细胞凋亡途径_4]。之前已有多人通过latedapoptosis—inducingligand，TRA

7、IL)是TNF超不同方式构建TRAIL的原核表达载体，并获得目的家族成员，可选择性的诱导肿瘤细胞、病毒感染细胞蛋白，但目的蛋白多以包涵体的形式表达。我们的实和转化细胞凋亡而对正常细胞无毒口‘3l，因此具有被验根据大肠杆菌表达的密码子偏爱性，优化编码开发成治疗肿瘤的蛋白质药物的可能性。其分子机TRAIL(114～281氨基酸)的基因，人工合成重组基制是受体DR4或DR5结合后诱发TRAIL发生三因，构建在表达质粒pET30a上，直接获得可溶性收稿Et期：2014—0212基金项目：河南省医学科技攻关计划项目资助(WKJ2007—021

8、)。作者简介：鲍应环(1987一)，女，河南信阳人，硕士研究生，从事抗体工程研究。通讯作者：刘峰涛(1970一)，男，河南开封人，博士，副教授，从事分子免疫的教学与科研工作。118JournalofHenanUniversity(Me