人β防御素-2稳定表达细胞株的建立及其表达产物对耐药大肠埃希菌抗菌活性研究-论文.pdf

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1、·704·免疫学杂志2014年8月第30卷第8期IMMUNOLOGICALJOURNALVo1．30No．8Aug．2014·论著·【文章编号]1ooo一8861(2014)08—0704—04；~Oql0．13431~．cnki．immuno1．j．20140154人13防御素一2稳定表达细胞株的建立及其表达产物对耐药大肠埃希菌抗菌活性研究杨剑，陈新年，李娟，陈逸轩，陈文莉【摘要】目的建立稳定表达人B防御素2(hBD2)的COS-7细胞株，并检测其表达产物对耐药大肠埃希菌的抗菌活性。方法将重组hBD2真核表达载体pCMV—hBD2通过脂质体转染COS一7细胞，筛选稳定表达h

2、BD2单克隆细胞株；经RT—PCR和Westernblot检测稳定转染后目的基因在转录水平和蛋白水平的表达；用微量稀释法检测稳定转染后细胞培养上清液对耐药大肠埃希菌的抗菌作用。结果筛选出稳定表达hBD2的COS一7细胞株，检测到目的基因在转录水平和蛋白水平均有表达，且其表达产物使耐药大肠埃希菌存活率降至15％。结论建立了稳定表达hBD2的COS-7细胞株，其表达产物对耐药大肠埃希菌具有一定的抗菌活性。[关键词】人B防御素一2；稳定表达；耐药大肠埃希菌；抗菌活性【中图分类号】R392．2【文献标识码】AAntimicrobialactivitiesagainstE．coliby

3、thestablecelllinetransfectedwithrecombinanthBD-2geneeukaryoticexpressionplasmidYANGJian，CHENXinnian，LIJuan，CHENYixuan，CHENWenliDepartmentofPathophysiology,LanzhouUniversity,Lanzhou730004ChinaCorrespondingAuthor：CHENXinnian,E—mail：chenxn@hu．edu．cn[Abstract]Inrecentyears，antibioticresistancei

4、soneoftheworld’Smostpressingpublichealthproblems．Thisstudywasdesignedtodetecttheofthehumanbetadefensin20aBD2)．Firstly，plasmidvectorpCMV—hBD2containingrecombinanthBD2genewasconstructedandtransfectedtoCOS-7cells，andthecelllinesstablyexpressinghBD2clonewasselected．Secondly，RT-PCRandWesternblot

5、wereappliedtoidentifymRNAandproteinlevelsofhBD2．Furthermore．thesupernatantsolutionofthestablecellswasmixedwithEcolisolutiontodetectedantimicrobiatactivities．DatashowedthathBD2wasexpressedsuccessfully．AndhBD2expressionproductcoulddecreasethesurvivalrateofEcolito15％．Inconclusion．thisstudycons

6、tructstablecelllinesofexpressinghBD2．andthehBD2expressionproductsdemonstratetheantimicrobialactivityagainstdrug-resistantEcoli．eywords]Humanbeta-defensin-2；Stableexpression；Drug-resistantEColi；Antimicrobialactivity防御素是一类富含精氨酸的内源性阳离子抗微得的量极其有限：化学合成不仅成本高且空间结构难生物肽，根据防御素分子内半胱氨酸所构成的3个二以与天然hBDs完全一

7、致：用原核细胞表达防御素存硫键的位置不同，可将防御素分为o【、B、03种【l-3]。人在翻译后加工及工程菌“自杀”等问题_l01。因此，通过B防御素(humanbeta—defensins，hBDs)广泛表达于基因工程技术将防御素基因导入真核细胞．建立稳定黏膜上皮细胞的一种内源性抗生素肽，不仅有广谱表达目的基因的细胞株，从而获得大量具有生物活性高效的抗微生物作用，还参与机体免疫应答、化学趋的防御素无疑是有效手段之一。化以及其他蛋白酶(如溶菌酶)的协同作用，目前尚未本研究利用分子生物学技术构建hBD2真核