泡菜汁中植物乳杆菌的分离鉴定-论文.pdf

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1、好实沃乳酸菌专栏泡菜汁巾糟物乳杆菌晌分离鉴定好北京好实沃生物技术有限公司公司电话：010—62681585杜志琳尹望陈春艳公司传真：010—62682283北京好实沃生物技术有限公司，北京101399公司网站：http：／／www．heswo~corrd电子邮箱：heswof@163．com办公地址：海淀区高梁桥斜街59号中坤大厦903摘要为丰富植物乳杆菌茵种来源，研究从泡菜汁中分离获得3株疑似植物乳杆菌的细菌，并分别对其编号。通过形态特征、生理生化鉴定和16SrDNA分子鉴定3种方法鉴定分离获得的3株细菌，结

2、果表明，分离获得的3株茵均为植物乳杆菌，分别是植物乳杆菌HEW—Z106、植物乳杆菌HEW—Z111和植物乳杆菌HEW—Z117。关键词泡菜汁；植物乳杆菌；分离鉴定中图分类号：S816．32文献标志码：A文章编号：1002—2813(2014)17—0022—04益生菌作为一种新型绿色饲料添加剂，受到各为植物乳杆菌的研究提供菌种来源。国研究者的重视，有着良好的发展前景。益生菌是1材料与方法对宿主有益的一类活性微生物，作用于人及动物体1．1材料肠道和生殖系统等，可改善宿主肠道微生态平衡，1．1．1分离材料发挥有益

3、作用。而乳酸菌作为一类应用广泛的益生自制泡菜汁作为分离菌种的材料。菌，是动物肠道中的优势菌群，其无毒、无残留及1．1．2菌种无抗药性备受关注。植物乳杆菌是一种常见于发酵植物乳杆菌购自中科院微生物菌种保藏中心，肉类、蔬菜和果汁中的乳酸菌，是人和动物肠道内作为生理生化鉴定中的模式菌株，在MRS培养基的主要菌群，呈革兰阳性杆菌，不形成芽孢、无鞭上常规培养。毛及不运动，过氧化氢酶试验呈阴性，能够产生细1．1．3供试主要培养基和试剂菌素等抑菌物质，可抑制革兰阳性菌、革兰阴性菌MRS培养基，MRS+碳酸钙培养基，LB培养及

4、真菌的生长，有研究表明饲喂植物乳杆菌可显著基等；十二烷基硫酸钠(SDS)、三羟甲基氨基甲地提高仔猪的饲料转化率(P<0．05)，并对其日增烷(Tris)碱和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)等质量略有提升，还可降低料重比；饲喂植物乳杆菌能细菌DNA提取的试剂为进口，16SrDNAPCR扩展够提高动物机体的免疫机能，调节肠道菌群的平衡，弓l物F：(5一AGAGTITrGATCCTGGCTCAG一3)和从而达到抵抗感染性及过敏性疾病，确保动物健康生R：(5一TACGGCTACCTT丌ACGACTT一3)由上海长。随着

5、人们对植物乳杆菌的认识的深入及现代生物生物工程有限公司合成。dNTP、TaqDNA聚合酶等均技术的飞速发展，新型的植物乳杆菌将会进一步发掘，购自生物工程(上海)有限公司，其他试剂均为国产并将广泛应用于今后的食品、医药和饲料添加剂等领分析纯试剂。域。研究通过从自制泡菜汁中分离获得植物乳杆菌，1．1．4试验仪器并鉴定分离获得的菌株，旨在丰富植物乳杆菌菌种库，见表1。1．2方法1．2．1植物乳杆菌的分离纯化收稿日期：2014—08—19第一作者：杜志琳，E—mail：heswof@163．tom取自制泡菜汁，用灭菌氯

6、化钠注射液稀释到22饲料研究I~'EEDRESEkl~tCHN《1720"l4好实沃乳酸菌专栏10“倍，取100L涂布于MRS+碳酸钙培养基平zl17。以上3株细菌在MRS培养基上用牙签挑起板上，37cc厌氧培养24—48h后，采用四分区划可形成黏液状拉丝，革兰阳性，无芽孢、荚膜及鞭线法，挑取产生溶钙圈且菌落形态疑似植物乳杆菌毛，菌体有细长弯曲杆状，排列无序，也有对生，的菌落形态的菌株，在MRS培养基平板上进行分两端顿圆，棒形球杆状。菌株的培养特征及菌体特离纯化培养，经24—48h培养后，挑取分离效果较性见表3

7、。从图1可见：HEW—Z117在加钙MRS好的菌株，用接种环接种于斜面上(MRS)进行纯培养基上，单个菌落能形成4—10mm溶钙圈。培养，于4o【=冰箱保存备用。裹3菌株培养特性、菌体特征及菌株菌落特征衰1主要仪器设备菌落菌落特征菌体特性HEW—Z106乳白色，表面凸起，圆形，革兰阳性，短杆状，排列仪器公司边缘整齐，表面光滑且湿润无序JA2003型电子天平上海舜宇恒平科学仪器有限HEW—Z11l乳白色，表面微凸起，小圆革兰阳性，短杆状，成对公司形，边缘整齐且光滑，湿润排列PB一1O型数字酸度计德国赛多利斯科学仪

8、器(北京)有限公司HEW—ZI17乳白色，呈凸透镜状，表面革兰阳性，棒球形杆状，成HZC一250型恒温振荡培养箱江苏省太仓市实验设备厂隆起，圆形，边缘整齐，湿对排列润，有光泽，光滑LDZH一200KBS型立式压力蒸汽灭菌器上海申安医疗器械厂T一42K型高速冷冻离心机德国KONTRON公司MG48+型PCR仪杭州朗基科学仪器有限公司GelDoc—It200型自动凝胶图像分析系统Ultra