高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定-论文.pdf

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1、广西医科大学学报2014Jun；31(3)·358·J一ouRNALOFGUANGXIMEDICALUNIVERSITY高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定韩创业赵春节刘锦愉杨劲松△(广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁530021)摘要目的：建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元(DRGn)的培养模型。方法：在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节(DRG)，通过胰蛋白酶消化，使用Neurobasal(NB)培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn。采用神经丝蛋白免疫细胞

2、化学染色法和hoechst染核鉴定并测定DRGn的纯度。结果：原代培养的DRGn在含有神经生长因子(NGF)的NB培养基中生长良好，存活时间可达45d，纯度可达到95以上。结论：该培养模型简单易行，培养稳定，可获得大量高纯度和存活时间长的DRGn。关键词背根神经节神经元；原代培养；大鼠胚胎中图分类号：R一33文献标志码：A文章编号：1005—930X(2O14)03—0358—04CULTUREANDIDENTIFICATIoNoFHIGHPURITYoFEMBRYoNICRATDoRSALRooTGANG

3、LIONNEURoNSHanChuangye，ZhaoChunjie，LiuJinyu，YangJinsong．(DepartmentofOrthopaedics，theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China)Abstract0bjective：Toestablishaeasierculturesystemwithlong—lived，highlypurifiedprimarydorsalrootgangli

4、onneurons(DRGn)derivedfromembryonicrats．Methods：DRGsweretakenoutfromembry—onicratsunderdissectingmicroscopesanddigestedwithtrypsin．Thenneurobasal(NB)mediumtogetherwithanti—mitoticdrugswereusedtoobtainpureDRGn．Identificationandpurificationwereevaluatedbyneu

5、rofilamentproteinimmunocytochemistrystainandHoechstnuclearstainingrespectively．Results：Pri—maryculturedDRGnwereabletogrowwellinNBmediumcontainingnervegrowthfactor(NGF)forupto45days，andthepurificationratewasupto95．Conclusion：Highlypurified，long—livingandsta

6、bleDRGncanbeeasilyharvestedbythissimplekindofculturemethod．Keywordsdorsalrootganglionneurons；primaryculture；embryonicrat体外培养可使相互独立的神经元和神经胶质细胞在与实验借鉴国内外方法l_l]，旨在建立一种取材容易、存活时间体内环境相似的条件下生长。随着相对纯化的细胞再次共长、纯度高的原代胎鼠DRGn的培养模型，以满足对DRGn培养，可进一步研究神经元的生长、神经元——神经胶质细的各种细胞

7、分子生物学研究。胞的相互作用，特别是髓鞘形成等。在体内，背根神经节神1材料与方法经元(DRGn)的轴突主要从中枢神经系统(CNS)和外周神经系统(PNS)伸展出来，在中枢(少突胶质细胞)和外周(雪旺细1．1实验动物和主要试剂：选用体重在250～300g的健康胞)神经胶质细胞的诱导下逐渐形成髓鞘。与此同时，体外成年雌雄SD大鼠，由广西医科大学动物中心提供，胎鼠孕龄培养的DRGn在加入神经生长因子(NGF)后将会有较长的的确定根据雌雄SD大鼠合笼后，次晨在鼠笼下面看到黄白生命周期。因此，共同培养纯化的DRGn和

8、成髓鞘细胞(如色的阴栓为妊娠第1天，记作E0，待孕15d(E15)时取材。雪旺氏细胞或少突胶质细胞)是一种较为理想的用于研究髓Leibovitz’SL一15培养基、Neurobasal培养基、胎牛血清、B-27鞘形成的方法，但神经细胞分化成熟后不再具备分裂能力，添加剂、神经生长因子(NGF)购自lifetechnologies公司。胰其体外培养对培养体系要求较高，培养具有较大的困难。本蛋白酶(Trypsin)、5