资源描述：
《新生大鼠背根神经节神经元的分离、培养及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、新生大鼠背根神经节神经元的分离、培养及鉴定张雨尧1梁宸1胡学昱2(通讯作者)(1第四军医大学学员旅陕西西安710032)(2第四军医大学西京医院骨科陕西西安710032)【摘要】目的：建立一种简单、稳定、高效的新生大鼠背根神经节神经元原代培养方法。方法：摘取新生24hSD大鼠背根神经节，采用0.25%胰酶和0.1%IV型胶原酶消化，制成单细胞悬液，接种于Neurobasal/B27无血清培养液中。将培养3d的DRGn于倒置相差显微镜下进行形态学观察，扫描电镜行细胞形态学检测，应用β-tubulinlllffl行免疫细胞化学染色，鉴定细胞纯度。结果：体外培养的背根神经节神经元牛长状态良
2、好，纯度可达到(92±6)%o结论：木实验方法简单、稳定、高效，可以获得高纯度的背根神经节神经元。【关键词】背根神经节；动物实验；细胞培养；纯化【中图分类号】R74【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2015)21-0034-03Thedissection,purificationandcultureofdorsalrootganglionneuronsfromnewbornratsZhangYuyaol,LiangChenl,HUXueyu(correspondingauthor)21FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’
3、an,Shanxi,710032,China2Departmentoforthopaedics,Xijinghospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an,Shanxi,710032,China[Abstract】ObjectiveToestablishansimple,efficient,reliablemethodforthepurificationculturesystemofdorsalrootganglionneuronsderivedfromnewbornrats.MethodsDorsalrootganglionsharv
4、estedfromnewbornSDratsweredigestedwiththemixtureoftrypsinandcollegoneaseIV,thenturnedintosinglecellsuspensionandplatedinneuralbasalmedia.Thepurifiedratewasevaluatedaccordingtocellcountandβ-tubulinlllimmunocytochemistrystain.ResultsCultureddorsalrootganglioncellscouldsurvivehealthily.Thepurifica
5、tionrateofneuronswas(92±6)%.ConclusionThemethod,whichisusedforcultureandpurificationofDRGn,isasimple,efficientandreliableway.Usingitcouldobtainhighlypurifyneurons.【Keywords]Dorsalrootganglion;Animalexperimentation;CellCulture;Purification背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)主要由感觉神经元组成，参与脊髓反射与感觉功能的调节，
6、DRG因其细胞种类、生物学特性单一，越来越受到人们的重视。背根神经节神经元(dorsalrootganglionneuron’DRGn)被广泛地应用于观察神经元的死亡过程、突触生长、生长因子的信号传导途径、疼痛过敏的研究及相关神经机制的研S[l-3]o我们采用新生大鼠DRGn来作为研究对象分析电刺激对神经元突起再生的影响，进行轴突生长发育的研究，是经典而常用的方法之一⑷。1.材料和方法1.1材料新生24hSD大鼠，由第四军医大学实验动物中心提供。DMEM/F12(l:l)i§养基、NeurobasalTM培养基、B・27添加剂、胎牛血清等购自Gibco公司，IV型胶原酶、cy3山羊抗小鼠二抗购
7、自Sigma公司，β-tubulinIII小鼠抗大鼠一抗购自Millipore公司。1.2方法1.2.1培养原代DRGn将新生鼠置于75%乙醇中浸泡3〜5min,再泡于盛有预冷D-Hank’s液的大皿中。解剖显微镜载物台上置一冰袋，将新生鼠置于冰袋上盛有D-Hank’s液的小皿中。用显微银剥离新生鼠背部皮肤及皮下组织，暴露脊柱及其两侧，由下至上纵行打开椎管；小心咬
