POLⅠ基因对人食管癌细胞放化疗敏感性的影响-论文.pdf

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1、南京医科大学学报(自然科学版)第33卷第1期ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING(Natura1Science)2013年1月POLI基因对人食管癌细胞放化疗敏感性的影响刘瑾，吴锦昌，周俊东(南京医科大学附属苏州医院放疗科，江苏苏州215001)[摘要]目的：探讨DNA聚合酶I(DNApolymeraseI，POLI)基因对人食管癌细胞ECA．109放射敏感性及对化疗药物顺铂敏感性的影响。方法：利用已经构建成功的针对POLI基因的短发夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)重组质粒，

2、转染ECA一109细胞．通过倒置荧光显微镜观察转染效率，实时荧光定量PCR检测转染后ECA一109细胞中POLI的mRNA表达水平，用细胞克隆形成实验来研究shRNA抑制POLI表达后ECA．109细胞对x线放疗敏感性的变化，用M1Tr法检测POLI基因敲除后ECA一109细胞对顺铂敏感性的变化。结果：沉默POLI基因的shRNA转染ECA．109细胞后，荧光倒置显微镜下可见大量绿色荧光颗粒：实时荧光定量PCR检测发现，转染后细胞中POLI的mRNA表达水平显著降低(P<0．05)；转染后的细胞对放疗敏感性提高，对顺铂的敏感性提高

3、(P<0．05)。结论：shRNA有效下调细胞中POLI的表达，提高了肿瘤细胞对化疗药物顺铂和放疗的敏感性。[关键词]POLI；shRNA；ECA109；放疗敏感；顺铂[中图分类号]R735．1[文献标志码]A[文章编号]1007．4368(2013)01—006—05doi：IO．7655／NYDXBNS20130102EffectsofPOLIonradiosensitivityofhumanesophagealcancercelllineanditssensitivitytocisplatinLiuJin，WuJinchan

4、g，ZhouJundong(DepartmentofRadiotherapy，theSuzhouHospitalAfiliatedtoNJMU，Suzhou215001，China)[Abstract]0bjective：ToinvestigatetheeffectofPOLI(DNApolymeraseI)ontheradiosensitivityofhumanesophagealcancercells(ECA一109)andtheirsensitivitytocisplatin．Methods：Theplasmidexpres

5、singshRNAagainstPOL1wasconstructedandtransfectedintoECA一109cells．Thetransfeetioneficiencywasevaluatedbyfluorescencemicroscopy．POLIexpressionwasdetectedbyReal—timeFluorogenicQuantitativePCR．ThecellsensitivitytoX—raywasdetectedbycolonyformationassay．MTrwasusedtodetermin

6、ethesensitivityofECA一109cellstocisplatin．Results：Aftersuccessfu1transfeetionofconstructedshRNA—POLIgeneintoECA一109cells，alargenumberoffluorescentparticleswereobservedinfluorescenceinvertedmicroscope．TheexpressionofPOLIinmRNAwassignificantlyreduced(P<0．05)．Theabilityof

7、radiosensitivitywasenhanced．Ontheotherhand．sensitivitytocisplatinwasenhanced(尸<0．05)．Conclusion：ShRNA-POLIinhumanesophagealcancercellscouldenhancetheirradiosensitivityandsensitivitytocisplatin．[Keywords]POLI；shRNA；ECA一109；radiosensitivity；cisplatin[ActaUnivMedNanjing，

8、2013，33(1)：006—010]DNA聚合酶I(DNApolymeraseI，POLI)是面由于缺少3一5端外切酶活性，在DNA复制中缺DNA聚合酶Y家族的成员之一．是一种参与DNA乏错配碱基的校正阅读功能。两方面均导致其对损伤修复的基因，一